Universal SYBR GREEN qPCR Premix (නිල්)
බළලා අංකය: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) යනු 2×තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR විස්තාරණය සඳහා වන පූර්ව විසඳුමකි, එය ඉහළ සංවේදීතාවකින් සහ නිශ්චිතතාවයකින් සංලක්ෂිත වේ, නිල් පැහැයෙන් යුක්ත වන අතර නියැදි එකතු කිරීමේ ලුහුබැඳීමේ බලපෑමක් ඇත.නියැදි සකස් කිරීමේදී ප්‍රයිමර් ඇනීල් කිරීම හේතුවෙන් විශේෂිත නොවන විස්තාරණය ඵලදායී ලෙස වලක්වාලීම සඳහා මූලික සංරචක Taq DNA පොලිමරේස් ප්‍රතිදේහ උණුසුම් ආරම්භය භාවිතා කරයි.ඒ අතරම, සූත්‍රය PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීමට සහ විවිධ GC අන්තර්ගතයන් (30 ~ 70%) සහිත ජානවල විස්තාරණය සමාන කිරීමට ප්‍රවර්ධනය කරන සාධක එකතු කරයි, එවිට ප්‍රමාණාත්මක PCR හට පුළුල් ප්රමාණාත්මකව හොඳ රේඛීය සම්බන්ධතාවයක් ලබා ගත හැකිය. කලාපයේ.මෙම නිෂ්පාදනයේ බොහෝ qPCR උපකරණ සඳහා අදාළ වන විශේෂ ROX Passive Reference Dye අඩංගු වේ.විවිධ උපකරණ මත ROX සාන්ද්රණය සකස් කිරීම අවශ්ය නොවේ.විස්තාරණය සඳහා ප්රතික්රියා පද්ධතිය සකස් කිරීම සඳහා ප්රාථමික සහ සැකිලි එකතු කිරීම පමණක් අවශ්ය වේ.
සංරචක
Universal Blue qPCR Master Mix
ගබඩා කොන්දේසි
නිෂ්පාදිතය අයිස් ඇසුරුම් සමඟ නැව්ගත කර ඇති අතර මාස 18 ක් සඳහා -25℃~-15℃ ගබඩා කළ හැක.ප්රතික්රියා පද්ධතිය ගබඩා කිරීමේදී හෝ සකස් කිරීමේදී ප්රබල ආලෝක ප්රකිරණය වැළැක්වීම අවශ්ය වේ.
පිරිවිතර
| සමාධිය | 2× |
| හඳුනාගැනීමේ ක්රමය | SYBR |
| PCR ක්රමය | qPCR |
| පොලිමරේස් | Taq DNA පොලිමරේස් |
| නියැදි වර්ගය | DNA |
| යෙදුම් උපකරණ | බොහෝ qPCR උපකරණ |
| නිෂ්පාදන වර්ගය | තත්‍ය කාලීන ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR සඳහා SYBR ප්‍රීමික්ස් |
| (යෙදුම) වෙත අයදුම් කරන්න | ජාන ප්රකාශනය |
උපදෙස්
1.ප්රතික්රියා පද්ධතිය
| සංරචක | Volome(μL) | Volome(μL) | අවසාන සාන්ද්රණය |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ප්‍රතිලෝම ප්‍රයිමර් (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | 50 දක්වා | 20 දක්වා | - |
[සටහන]: දැඩි සෙලවීමෙන් අධික බුබුලු වළක්වා ගැනීම සඳහා භාවිතයට පෙර තරයේ මිශ්ර කරන්න.
අ) ප්රාථමික සාන්ද්රණය: අවසාන ප්රාථමික සාන්ද්රණය 0.2μmol/L වන අතර, සුදුසු පරිදි 0.1 සහ 1.0μmol/L අතර සකස් කළ හැක.
ආ) සැකිලි සාන්ද්රණය: අච්චුව තනුක නොකළ cDNA කොටස් ද්‍රාවණය නම්, භාවිතා කරන පරිමාව qPCR ප්‍රතික්‍රියාවේ මුළු පරිමාවෙන් 1/10 නොඉක්මවිය යුතුය.
c) සැකිලි තනුක කිරීම: cDNA කොටස් ද්‍රාවණය 5-10 ගුණයකින් තනුක කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.විස්තාරණය කිරීමෙන් ලබාගත් Ct අගය චක්‍ර 20-30 ක් වන විට එකතු කරන ලද අච්චුවේ ප්‍රශස්ත ප්‍රමාණය වඩා හොඳය.
d) ප්රතික්රියා පද්ධතිය: ඉලක්කගත ජාන වර්ධකයේ සඵලතාවය සහ පුනරාවර්තනය සහතික කිරීම සඳහා 20μL හෝ 50μL භාවිතා කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.
e) පද්ධති සකස් කිරීම: කරුණාකර සුපිරි පිරිසිදු බංකුවක සූදානම් කර න්‍යෂ්ටික අපද්‍රව්‍ය නොමැතිව ඉඟි සහ ප්රතික්රියා නල භාවිතා කරන්න;පෙරහන් කාට්රිජ් සමඟ ඉඟි භාවිතා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.හරස් දූෂණය සහ aerosol දූෂණයෙන් වළකින්න.
2.ප්රතික්රියා වැඩසටහන
සම්මත වැඩසටහන
| චක්‍ර පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් |
| ආරම්භක denaturation | 95℃ | විනාඩි 2 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 10 | 40 |
| Annealing/Extension | 60℃ | තත්පර 30 ★ | |
| දියවන වක්‍ර අදියර | උපකරණ පෙරනිමි | 1 | |
ඉක්මන් වැඩසටහන
| චක්‍ර පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් |
| ආරම්භක denaturation | 95℃ | තත්පර 30 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 3 | 40 |
| Annealing/Extension | 60℃ | තත්පර 20 ★ | |
| දියවන වක්‍ර අදියර | උපකරණ පෙරනිමි | 1 | |
[සටහන]: වේගවත් වැඩසටහන ජාන බහුතරයක් සඳහා සුදුසු වන අතර, තනි සංකීර්ණ ද්විතියික ව්‍යුහ ජාන සඳහා සම්මත වැඩසටහන් අත්හදා බැලිය හැක.
අ) උෂ්නත්වය සහ වේලාව: කරුණාකර ප්‍රාථමිකයේ සහ ඉලක්ක ජානයේ දිග අනුව සකස් කරන්න.
b) ප්‍රතිදීප්ත සංඥා අත්පත් කර ගැනීම (★): කරුණාකර උපකරණය භාවිතා කිරීම සඳහා වන උපදෙස්වල අවශ්‍යතා අනුව පරීක්ෂණ ක්‍රියා පටිපාටිය සකසන්න.
ඇ) ද්රවාංක වක්රය: උපකරණ පෙරනිමි වැඩසටහන සාමාන්යයෙන් භාවිතා කළ හැක.
3. ප්රතිඵල විශ්ලේෂණය
ප්‍රමාණාත්මක පරීක්ෂණ සඳහා අවම වශයෙන් ජීව විද්‍යාත්මක අනුරූ තුනක් අවශ්ය විය.ප්රතික්රියාවෙන් පසුව, විස්තාරණ වක්රය සහ දියවන වක්රය තහවුරු කිරීම අවශ්ය වේ.
3.1 වර්ධක වක්රය:
සම්මත විස්තාරණ වක්රය S-හැඩය.Ct අගය 20 සහ 30 අතර පහත වැටෙන විට ප්‍රමාණාත්මක විශ්ලේෂණය වඩාත් නිවැරදි වේ. Ct අගය 10 ට වඩා අඩු නම්, අච්චුව තනුක කර නැවත පරීක්ෂණය සිදු කිරීම අවශ්ය වේ.Ct අගය 30-35 අතර වන විට, විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීම සහ ප්රතිඵල විශ්ලේෂණයේ නිරවද්යතාව සහතික කිරීම සඳහා, අච්චු සාන්ද්රණය හෝ ප්රතික්රියා පද්ධතියේ පරිමාව වැඩි කිරීම අවශ්ය වේ.Ct අගය 35 ට වඩා වැඩි වන විට, පරීක්ෂණ ප්රතිඵල මගින් ජානයේ ප්රකාශනය ප්රමාණාත්මකව විශ්ලේෂණය කළ නොහැකිය, නමුත් ගුණාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා භාවිතා කළ හැක.
3.2 දියවන වක්රය:
ද්රවාංක වක්‍රයේ තනි උච්චය පෙන්නුම් කරන්නේ ප්රතික්රියා විශේෂත්වය යහපත් බවත් ප්‍රමාණාත්මක විශ්ලේෂණයක් සිදු කළ හැකි බවත්ය;දියවන වක්රය ද්විත්ව හෝ බහු මුදුන් පෙන්නුම් කරන්නේ නම්, ප්‍රමාණාත්මක විශ්ලේෂණය සිදු කළ නොහැක.ද්රවාංක වක්රය ද්විත්ව ශිඛර පෙන්නුම් කරන අතර, ඉලක්ක නොවන උච්චය ප්‍රයිමර් ඩයිමර් ද නැතහොත් DNA ඇගරෝස් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් මගින් විශේෂිත නොවන විස්තාරණය ද යන්න විනිශ්චය කිරීම අවශ්ය වේ.එය ප්රාථමික ඩයිමර් නම්, ප්රාථමික සාන්ද්රණය අඩු කිරීම හෝ ඉහළ විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාවයකින් ප්‍රයිමර් ප්‍රතිනිර්මාණය කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.එය විශේෂිත නොවන විස්තාරණයක් නම්, කරුණාකර ඇනීලිං උෂ්ණත්වය වැඩි කරන්න, නැතහොත් ප්‍රයිමර් නිශ්චිතව ප්‍රතිනිර්මාණය කරන්න.
සටහන්
ඔබේ සෞඛ්‍යය සහ ආරක්ෂාව සහතික කිරීම සඳහා කරුණාකර අවශ්ය PPE, එවැනි රසායනාගාර කබාය සහ අත්වැසුම් පළඳින්න!
මෙම නිෂ්පාදනය පර්යේෂණ භාවිතය සඳහා පමණි!
