ප්රෝටීන් K mNGS (දියර)
Proteinase K යනු පුළුල් උපස්ථර විශේෂත්වයක් සහිත ස්ථායී සෙරීන් ප්‍රෝටීස් වර්ගයකි.එය ඩිටර්ජන්ට් තිබියදී පවා දේශීය ප්‍රාන්තයේ බොහෝ ප්‍රෝටීන පිරිහීමට ලක් කරයි.ස්ඵටික සහ අණුක ව්‍යුහ අධ්‍යයනයෙන් ලැබෙන සාක්ෂිවලින් පෙනී යන්නේ එන්සයිමය සක්‍රීය අඩවි උත්ප්‍රේරක ත්‍රිකෝණයක් සහිත උපටිලිසින් පවුලට අයත් බවයි.39-ඔහුගේ69-සර්224)කැඩී යාමේ ප්‍රධාන ස්ථානය වන්නේ අවහිර වූ ඇල්ෆා ඇමයිනෝ කාණ්ඩ සහිත ඇලිෆැටික් සහ ඇරෝමැටික ඇමයිනෝ අම්ල කාබොක්සිල් කාණ්ඩයට යාබද පෙප්ටයිඩ බන්ධනයයි.එය එහි පුළුල් විශේෂත්වය සඳහා බහුලව භාවිතා වේ.මෙම ප්‍රෝටීනේස් K විශේෂයෙන් නිර්මාණය කර ඇත්තේ mNGS සඳහාය.අනෙකුත් ප්‍රෝටීනේස් K හා සසඳන විට, එහි එන්සයිම ක්‍රියාකාරීත්වය සමඟ ඊටත් වඩා අඩු න්‍යෂ්ටික අම්ල දූෂණයක් අඩංගු වන අතර එමඟින් පහළ mNGS යෙදුම වඩා හොඳින් සහතික කළ හැකිය.
ගබඩා කොන්දේසි
වසර 2ක් සඳහා 2-8℃
පිරිවිතර
| පෙනුම | අවර්ණ සිට ලා දුඹුරු දියර |
| ක්රියාකාරිත්වය | ≥800 U/ml |
| ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය | ≥20 mg/මිලි |
| නිකේස් | කිසිවක් අනාවරණය නොවීය |
| DNase | කිසිවක් අනාවරණය නොවීය |
| RNase | කිසිවක් අනාවරණය නොවීය |
දේපළ
| EC අංකය | 3.4.21.64(Tritirachium ඇල්බමයෙන් Recombinant) |
| සම විද්යුත් ලක්ෂ්‍යය | 7.81 |
| ප්රශස්ත pH අගය | 7.0- 12.0 රූපය 1 |
| ප්රශස්ත උෂ්ණත්වය | 65 ℃ රූපය 2 |
| pH ස්ථායීතාවය | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) රූපය 3 |
| තාප ස්ථායීතාවය | 50 ℃ ට අඩු (pH 8.0, 30 min) රූපය 4 |
| ගබඩා ස්ථාවරත්වය | 25℃ හි මාස 12 ක් සඳහා 90% කට වැඩි ක්‍රියාකාරකම් |
| සක්රිය කරන්නන් | SDS, යූරියා |
| නිෂේධක | ඩයිසොප්රොපයිල් ෆ්ලෝරෝෆොස්පේට්;phenylmethylsulfonyl ෆ්ලෝරයිඩ් |
අයදුම්පත්
1. ජාන රෝග විනිශ්චය කට්ටලය
2. RNA සහ DNA නිස්සාරණ කට්ටල
3. පටක වලින් ප්රෝටීන් නොවන සංරචක නිස්සාරණය කිරීම, DNA වැනි ප්රෝටීන් අපද්‍රව්‍ය හායනයඑන්නත් සහ හෙපටින් සකස් කිරීම
4. ස්පන්දන විද්යුත් විච්ඡේදනය මගින් වර්ණදේහ DNA සකස් කිරීම
5. Western blot
6. එන්සයිම ග්ලයිකෝසිලේටඩ් ඇල්බියුමින් ප්රතික්රියාකාරක in vitro රෝග විනිශ්චය
පූර්වාරක්‍ෂා
භාවිතා කරන විට හෝ බර කිරන විට ආරක්ෂිත අත්වැසුම් සහ ඇස් කණ්ණාඩි පළඳින්න, භාවිතයෙන් පසු හොඳින් වාතාශ්‍රය තබා ගන්න.මෙම නිෂ්පාදනය සමේ ආසාත්මිකතා ප්රතික්රියාවක් සහ බරපතල අක්ෂි කෝපයක් ඇති කළ හැකිය.ආශ්වාස කළහොත්, අසාත්මිකතා හෝ ඇදුම රෝග ලක්ෂණ හෝ හුස්ම හිරවීම ඇති විය හැක.ශ්වසන කෝපයක් ඇති විය හැක.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් (U) යනු කැසීන් 1 μmol නිපදවීමට ජල විච්ඡේදනය කිරීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.පහත සඳහන් කොන්දේසි යටතේ විනාඩියකට tyrosine.
ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම
ප්රතික්රියාකාරක I: 1g කිරි කැසීන් 0.1M සෝඩියම් පොස්පේට් ද්‍රාවණයේ (pH 8.0) මිලිලීටර් 50ක දියකර, 65-70 ℃ ජලයේ විනාඩි 15ක් පුරවා, කලවම් කර දියකර, ජලයෙන් සිසිල් කර, සෝඩියම් හයිඩ්‍රොක්සයිඩ් මගින් pH 8.0ට සකසන ලද අතර, පරිමාව ස්ථාවර කර ඇත. මිලි ලීටර් 100
ප්රතික්රියාකාරක II: ට්‍රයික්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය 0.1M, සෝඩියම් ඇසිටේට් 0.2M, ඇසිටික් අම්ලය 0.3M.
ප්රතික්රියාකාරක III: 0.4M Na2CO3විසඳුමක්.
ප්රතික්රියාකාරක IV: ෆෝරින්ට් ප්‍රතික්‍රියාකාරකය 5 වරක් පිරිසිදු ජලය සමග තනුක කර ඇත.
ප්රතික්රියාකාරක V: එන්සයිම තනුක: 0.1M සෝඩියම් පොස්පේට් ද්‍රාවණය (pH 8.0).
ප්රතික්රියාකාරක VI: තයිරොසීන් ද්‍රාවණය: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine 0.2 සමඟ විසුරුවාඑම් එච්.සී.එල්.
පටිපාටිය
1. 0.5ml ප්රතික්රියාකාරක I 37℃ ට පෙර රත් කර, එන්සයිම ද්‍රාවණය 0.5ml එකතු කර හොඳින් මිශ්‍ර කර ඉන්කියුබේට් කරන්න.විනාඩි 10ක් සඳහා 37℃.
2. ප්‍රතික්‍රියාව නැවැත්වීමට ප්රතික්රියාකාරක II මිලි ලීටර් 1 ක් එකතු කරන්න, හොඳින් මිශ්‍ර කර විනාඩි 30 ක් පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කරන්න.
3. කේන්ද්රාපසාරී ප්රතික්රියා විසඳුම.
4. සුපර්නැටන්ට් 0.5ml ගන්න, 2.5ml ප්රතික්රියාකාරක III, 0.5ml ප්රතික්රියාකාරක IV එකතු කරන්න, හොඳින් මිශ්‍ර කර 37℃ උෂ්ණත්වයකදී ඉන්කියුබේට් කරන්න.විනාඩි 30ක් සඳහා.
5. OD660OD ලෙස තීරණය විය1;හිස් පාලන කණ්ඩායම: එන්සයිම වෙනුවට 0.5ml ප්රතික්රියාකාරක V භාවිතා කරයිOD තීරණය කිරීමට විසඳුම660OD ලෙස2, ΔOD=OD1-ඕඩී2.
6. L-tyrosine සම්මත වක්‍රය: 0.5mL විවිධ සාන්ද්රණය L-tyrosine ද්‍රාවණය, 2.5mL ප්රතික්රියාකාරක III, 5mL කේන්ද්රාපසාරී නලයේ 0.5mL ප්රතික්රියාකාරක IV, මිනිත්තු 30ක් සඳහා 37℃ තුළ පුර්වාතනය කරන්න, OD සඳහා හඳුනා ගන්න660L-tyrosine හි විවිධ සාන්ද්රණය සඳහා, පසුව සම්මත වක්‍රය Y=kX+b ලබා ගත් අතර, Y යනු L-tyrosine සාන්ද්රණය, X යනු OD600.
ගණනය කිරීම
2: ප්රතික්රියා ද්‍රාවණයේ සම්පූර්ණ පරිමාව (mL)
0.5: එන්සයිම ද්‍රාවණයේ පරිමාව (mL)
0.5: වර්ණදේහ නිර්ණය (mL) සඳහා භාවිතා කරන ප්රතික්රියා ද්රව පරිමාව
10: ප්රතික්රියා කාලය (මිනි)
Df: තනුක බහු
C: එන්සයිම සාන්ද්රණය (mg/mL)
යොමු කිරීම්
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.ජෛව භෞතික.Res.කොමියුනිස්ට්(1971);44:513.
3. හිල්ස්, එච්.et al.,EUR.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. Sambrook ජේet අල්., අණුක ක්ලෝනකරණය: රසායනාගාර අත්පොත, 2 වන සංස්කරණය, සීතල වසන්ත වරායරසායනාගාර මුද්‍රණාලය, සීතල වසන්ත වරාය (1989).
සංඛ්යා
රූපය.1 ප්රශස්ත pH
100mM බෆර විසඳුම: pH6.0-8.0, Na-phosphate;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH.එන්සයිම සාන්ද්රණය:1mg/mL
Fig.2 ප්රශස්ථ උෂ්ණත්වය
20 mM K-පොස්පේට් බෆරයේ ප්‍රතික්‍රියාව pH 8.0.එන්සයිම සාන්ද්රණය: 1 mg/mL
Fig.3 pH අගය ස්ථාවරත්වය
25 ℃, 16 h-ප්‍රතිකාරය 50 mM බෆර ද්‍රාවණය: pH 4.5- 5.5, ඇසිටේට්;pH 6.0-8.0, Na-පොස්පේට්;pH 8.0-9.0, Tris-එච්.සී.එල්.pH 9.0- 12.5, Glycine-NaOH.එන්සයිම සාන්ද්රණය: 1 mg/mL
Fig.4 තාප ස්ථාවරත්වය
50 mM Tris-HCl බෆරය සමඟ මිනිත්තු 30-ප්‍රතිකාර, pH 8.0.එන්සයිම සාන්ද්රණය: 1 mg/mL
Fig.5 ගබඩාව ස්ථාවරty at 25℃
