5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
බළලා අංකය: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) යනු එක්-පියවර ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම සහ ප්‍රමාණාත්මක PCR (qRT-PCR) සඳහා සුදුසු ඉතා ස්ථායී එක්-නල පරීක්ෂණ පදනම් වූ මිශ්‍රණයකි.එය ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රොබ්ස් පූර්ව මිශ්ර කිරීමට සහය වන අතර අඩු උෂ්ණත්වයකදී දිගු කාලයක් ගබඩා කිරීමෙන් පසු ස්ථායීව පවතී.පරීක්ෂා කළ යුතු නියැදිය භාවිතා කරන විට, අතිරේක නල විවෘත කිරීම/නල දැමීමේ මෙහෙයුමකින් තොරව සෘජුවම එකතු කළ හැක.මෙම නිෂ්පාදනය සංරචක සපයයි, උදා-උණුසුම්-ආරම්භක DNA පොලිමරේස්, M-MLV, තාප-ලේබල් යුරැසිල් DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (dTTP වෙනුවට dUTP සමඟ), සහ ස්ථායීකාරක.ජානමය වශයෙන් වෙනස් කරන ලද වේගවත් වර්ධක ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් සහ ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් සමඟ, මිනිත්තු 20-40ක් ඇතුළත PCR විස්තාරණය සම්පූර්ණ කළ හැකිය.මෙම ප්‍රතික්‍රියාකාරකය ප්‍රති-නිරෝධක විස්තාරණ එන්සයිම සහ UNG එන්සයිම මිශ්ර එන්සයිම සමඟ qPCR සඳහා විශේෂ බෆරයක් භාවිතා කරයි.එබැවින්, එය ඉලක්කගත ජානවල හොඳ විස්තාරණයක් ලබා ගත හැකි අතර PCR අවශේෂ සහ aerosol දූෂණය නිසා ඇති වන ව්‍යාජ විස්තාරණය වළක්වා ගත හැකිය.මෙම ප්‍රතික්‍රියාකාරකය Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad සහ Roche වැනි නිෂ්පාදකයන්ගේ බොහෝ ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණ සමඟ අනුකූල වේ.
සංරචකය
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG මිශ්‍රණය
2.5×Neoscript Fast RT Premix බෆරය (dUTP)
ගබඩා කොන්දේසි
සියලුම සංරචක දිගුකාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා -20℃ සහ මාස 3 දක්වා 4℃ තබා ගත යුතුය.කරුණාකර භාවිතා කිරීමට පෙර දියවීම සහ කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසුව තරයේ මිශ්ර කරන්න.නිතර කැටි ගැසීමෙන් වළකින්න.
qRT-PCR ප්රතික්රියා පද්ධතිය සකස් කිරීම
| සංරචක | 25μLපද්ධති | 50μLපද්ධති | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 5×Neoscript Fast RT Premix බෆරය (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG මිශ්‍රණය | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| සැකිල්ල RNAb | – | – | – |
| ddH2O | 25μL දක්වා | 50μL දක්වා | – |
1) a.ප්‍රාථමිකයේ අවසාන සාන්ද්රණය සාමාන්‍යයෙන් 0.2μM වේ.වඩා හොඳ ප්‍රතිඵල සඳහා, ප්‍රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක.සාමාන්‍යයෙන්, පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය 0.1-0.3μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක.
2) b. වේගවත් PCR ක්රියා පටිපාටියක් භාවිතා කරන විට, ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණවල සාන්ද්රණය වැඩි කිරීමෙන් වඩා හොඳ විස්තාරණ ප්‍රතිඵල ඇති විය හැකි අතර, ඒවායේ අනුපාතය ඒ අනුව ප්‍රශස්ත කළ යුතුය.
3) විවිධ වර්ගයේ සාම්පලවල විවිධ වර්ගවල සහ නිෂේධකයේ අන්තර්ගතය සහ ඉලක්කගත ජානයේ පිටපත් අංකය අඩංගු වේ.නියැදි පරිමාව සැබෑ තත්ත්වය අනුව සලකා බැලිය යුතුය.අවශ්‍ය නම්, නියැදිය න්‍යෂ්ටික රහිත ජලය හෝ TE බෆරය සමඟ තනුක කරන්න.
ප්‍රතික්‍රියාව Cකොන්දේසි
| නිතිපතා PCR ක්රියා පටිපාටිය | වේගවත් PCR ක්රියා පටිපාටිය | ||||||
| පටිපාටිය | උෂ්ණත්වය | කාලය | චක්රය | පටිපාටිය | උෂ්ණත්වය | කාලය | චක්රය |
| ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම | 50℃ | විනාඩි 10-20 | 1 | ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම | 50℃ | විනාඩි 5 | 1 |
| පොලිමරේස් සක්රිය කිරීම | 95℃ | විනාඩි 1-5 | 1 | පොලිමරේස් සක්රිය කිරීම | 95℃ | 30s | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20 තත් | 40-50 | Denaturation | 95℃ | 1-3 තත් | 40-50 |
| නිර්වින්දනය සහ දිගු කිරීම | 56-64℃ | 20-60 ගණන්වල | නිර්වින්දනය සහ දිගු කිරීම | 56-64℃ | 3-20 තත් | ||
තත්ත්ව පාලනය
1.කාර්යය හඳුනාගැනීම: qPCR හි සංවේදීතාව, නිශ්චිතභාවය සහ පුනරාවර්තනය.
2.බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නොමැත: බාහිර එන්ඩොනියුක්ලීස් සහ එක්සෝනියුක්ලීස් දූෂණය නොමැත.
සටහන්
1.වේගවත් DNA පොලිමරේස් වල විස්තාරණ අනුපාතය 1kb/10s ට නොඅඩු වේ.විවිධ PCR උපකරණ විවිධ උනුසුම් සහ සිසිලන වේගයන්, උෂ්ණත්ව පාලන මාතයන් සහ තාප සන්නායකතාවය ඇති අතර, එම නිසා ඔබේ නිශ්චිත වේගවත් PCR උපකරණය සමඟ ඒකාබද්ධව ඔබේ ප්‍රාථමික/පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය සහ ධාවන ක්‍රමය ප්‍රශස්ත කිරීම අත්‍යවශ්‍ය වේ.
2.මෙම නිෂ්පාදනය පුළුල් ලෙස අදාළ වන අතර, එය අධි-සංවේදී අණුක රෝග විනිශ්චය සඳහා සුදුසු වේ.තුන්-පියවර PCR ක්‍රමය අඩු ඇනීලිං උෂ්ණත්වය සහිත ප්‍රයිමර් සඳහා හෝ 200 bp ට වැඩි දිගු කොටස් විස්තාරණය කිරීම සඳහා නිර්දේශ කෙරේ.
3.විවිධ ඇම්ප්ලිකෝනවල dUTP හි විවිධ භාවිත කාර්යක්ෂමතාව සහ UNG සඳහා විවිධ සංවේදීතාව ඇති බැවින්, UNG පද්ධතිය භාවිතා කරන විට හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව අඩු වුවහොත් ප්‍රතික්‍රියාකාරක ප්‍රශස්ත කළ යුතුය.අවශ්‍ය නම් තාක්ෂණික සහාය සඳහා කරුණාකර අප හා සම්බන්ධ වන්න.
4.රැගෙන යාමේ PCR නිෂ්පාදන විස්තාරණය කිරීම වැළැක්වීම සඳහා, විස්තාරණය සඳහා කැප වූ පර්යේෂණාත්මක ප්‍රදේශයක් සහ පයිප්පයක් අවශ්‍ය වේ.අත්වැසුම් සමඟ ක්රියා කිරීම සහ නිතර වෙනස් කිරීම සහ විස්තාරණය කිරීමෙන් පසු PCR නළය විවෘත නොකරන්න.
