Wild Taq DNA පොලිමරේස්
Taq DNA Polymerase යනු Thermus aquaticus YT-1 හි තාප ස්ථායී DNA පොලිමරේස් වන අතර එය 5′→3′ පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරිත්වයක් සහ 5´ ෆ්ලැප් එන්ඩොනියුක්ලීස් ක්‍රියාකාරිත්වයක් ඇත.
සංරචක
| සංරචකය | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq බෆරය | 2×1 මිලි | 2×10 මිලි | 2×50 මිලි | 5 × 200 මිලි |
| Taq DNA පොලිමරේස් (5 U/μL) | 0.1 මිලි | 1 මිලි | 5 මිලි | 5×10 මිලි |
ගබඩා තත්ත්වය
0°C ට අඩු ප්‍රවාහනය සහ -25°C~-15°C දී ගබඩා කළ යුතුය.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් යනු 75°C උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 30 කින් dNTP 15 nmol අම්ල ද්‍රාව්‍ය ද්‍රව්‍යයට ඇතුළත් කරන එන්සයිම ප්රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.
තත්ත්ව පාලනය
1.ප්‍රෝටීන් සංශුද්ධතා තක්සේරුව (SDS-PAGE):Taq DNA පොලිමරේස් වල සංශුද්ධතාවය ≥95% SDS-PAGE විශ්ලේෂණය මගින් තීරණය කරන ලදී.
2.Endonuclease ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 5 U Taq DNA පොලිමරේස් 1 μg λDNA සමඟ 37 ℃ පැය 16ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
3.Exonuclease ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 5 U Taq DNA පොලිමරේස් 1 μg λ -Hind Ⅲ ජීරණය DNA 37 ℃ පැය 16 ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
4.නිකේස් ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 5 U Taq DNA පොලිමරේස් 1 μg pBR322 DNA සමඟ 37 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
5.RNase ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 5 U Taq DNA පොලිමරේස් 1.6 μg MS2 RNA සමඟ 37 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
6.E. coliDNA:E. coli 16S rRNA ලොකස් සඳහා විශේෂිත වූ ප්‍රයිමර් සමඟ TaqMan qPCR භාවිතයෙන් E. coli ප්‍රවේණික DNA පැවතීම සඳහා Taq DNA පොලිමරේස් 5 U පරීක්ෂා කරනු ලැබේ.E. coli ජානමය DNA දූෂණය ≤1 පිටපතකි.
7.PCR විස්තාරණය (5.0 kb Lambda DNA)- PCR වර්ධක චක්‍ර 25ක් සඳහා Taq DNA පොලිමරේස් ඒකක 5ක් සමඟ 5 ng Lambda DNA අඩංගු 50 µL ප්‍රතික්‍රියාවක් මඟින් අපේක්ෂිත 5.0 kb නිෂ්පාදනයක් ලැබේ.
ප්‍රතික්‍රියා සැකසුම
| සංරචක | පරිමාව |
| DNA සැකිල්ලa | විකල්ප |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM ප්‍රතිලෝම ප්‍රයිමර් | 1 μL |
| dNTP මිශ්‍රණය (මිලිමීටර් 10 බැගින්) | 1 μL |
| 10× Taq බෆරය | 5 μL |
| Taq DNA පොලිමරේස්බී | 0.25 μL |
| න්යෂ්ටික රහිත ජලය | 50 μL දක්වා |
සටහන්:
1) විවිධ සැකිලි වල ප්‍රශස්ත ප්‍රතික්‍රියා සාන්ද්‍රණය වෙනස් වේ.පහත වගුවේ දැක්වෙන්නේ 50 µL ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියේ නිර්දේශිත අච්චු භාවිතයයි.
| DNA | ප්රමාණය |
| ජානමය | 1 ng-1 μg |
| ප්ලාස්මිඩ් හෝ වෛරස් | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNA Polymerase හි ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය විශේෂිත යෙදුම්වල 0.25 µL~1 µL සිට පරාසයක පවතී.
ප්රතික්රියාවවැඩසටහන
| පියවර | උෂ්ණත්වය(°C) | කාලය | සයිකල් |
| ආරම්භක denaturationa | 95℃ | විනාඩි 5 | - |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 15-30 | 30-35 සයිකල් |
| නිර්වින්දනයබී | 60℃ | තත්පර 15 යි | |
| දිගු කිරීම | 72℃ | 1kb/min | |
| අවසාන දිගුව | 72℃ | විනාඩි 5 | - |
සටහන්:
1) බොහෝ විස්තාරණ ප්‍රතික්‍රියා සඳහා මූලික විකෘති තත්ත්වය සුදුසු වන අතර සැකිලි ව්‍යුහයේ සංකීර්ණත්වය අනුව වෙනස් කළ හැක.සැකිලි ව්‍යුහය සංකීර්ණ නම්, ආරම්භක අවප්‍රමාණය කිරීමේ බලපෑම වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා පූර්ව-ඩීනාටරේෂන් කාලය විනාඩි 5 - 10 දක්වා දීර්ඝ කළ හැක.
2) සාමාන්‍යයෙන් ප්‍රාථමිකයේ Tm අගයට වඩා 3~5 ℃ අඩු ලෙස සකසා ඇති ප්‍රයිමරයේ Tm අගය අනුව ඇනීලිං උෂ්ණත්වය සකස් කළ යුතුය;සංකීර්ණ සැකිලි සඳහා, ඵලදායි විස්තාරණය ලබා ගැනීම සඳහා ඇනීලිං උෂ්ණත්වය සකස් කිරීම සහ දිගු කිරීමේ කාලය දීර්ඝ කිරීම අවශ්ය වේ.
