Superstart qPCR Premix plus-UNG
බළලා අංකය: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG යනු තත්‍ය කාලීන PCR ගුණාත්මක සහ ප්‍රමාණාත්මක ප්රතික්රියා සඳහා නිර්මාණය කර ඇති විශේෂිත ප්‍රතික්‍රියාකාරකයක් වන අතර එය ලයොෆිලකරණ ක්‍රියාවලීන් සඳහා විෙශේෂෙයන් සංවර්ධනය කරන ලදී.එහි නව උණුසුම්-ආරම්භක එන්සයිම Hotstart Taq plus (DG) අඩංගු වේ, එහි Taq එන්සයිම ක්‍රියාකාරකම් කාමර උෂ්ණත්වයේ දී මුද්‍රා තබා ඇති අතර, අඩු උෂ්ණත්ව තත්ත්ව යටතේ ප්‍රයිමර් විශේෂිත නොවන ඇනීලින් හෝ ප්‍රයිමර් ඩිමර් සෑදීම නිසා ඇතිවන විශේෂිත නොවන විස්තාරණය ඵලදායී ලෙස වළක්වයි. විස්තාරණ ප්රතික්රියාවේ විශේෂත්වය.මෙම ප්‍රතික්‍රියාකාරකය වේගවත් උණුසුම් ආරම්භයක් ලබා ගැනීම සඳහා ප්‍රශස්ත qPCR විශේෂිත බෆරයක් සහ UNG/dUTP ප්‍රති-දූෂණ පද්ධතියක් භාවිතා කරයි, qPCR ප්රතික්රියා වල කාර්යක්ෂමතාව සහ සංවේදීතාව බෙහෙවින් වැඩි දියුණු කරයි.එයට පුළුල් පරාසයක ප්‍රමාණකරණ ක්ෂේත්‍රවල හොඳ සම්මත වක්‍ර ලබා ගත හැකි අතර නිවැරදිව ප්‍රමාණකරණය සිදු කළ හැකි අතර, අවශේෂ PCR නිෂ්පාදන හෝ aerosol දූෂණය හේතුවෙන් සිදුවන ව්‍යාජ ධනාත්මක විස්තාරණය ඵලදායී ලෙස වළක්වයි.මෙම ප්‍රතික්‍රියාකාරකය Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad සහ Roche යනාදී නිෂ්පාදකයන්ගේ බොහෝ ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණ සමඟ ගැළපෙන අතර, lyophilized ආකාරයෙන් හොඳ ස්ථාවරත්වයක් පෙන්නුම් කරයි.
ප්රතික්රියාකාරක සංයුතිය
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+නොමිලේ) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (විකල්ප)
ගබඩා කොන්දේසි
-20℃ දී දිගුකාලීන ගබඩා කිරීම;මාස 3 ක් දක්වා 4℃ ගබඩා කළ හැක.භාවිතයට පෙර සහ හොඳින් මිශ්ර කරන්නනැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම වළක්වා ගන්න.
පාපැදි ප්රොටෝකෝලය
| පටිපාටිය | උෂ්ණත්වය | කාලය | චක්රය |
| ජීර්ණය | 50℃ | විනාඩි 2 | 1 |
| පොලිමරේස් සක්රිය කිරීම | 95℃ | විනාඩි 1~5 | 1 |
| ඩෙනේචර් | 95℃ | 10~20 තත් | 40-50 |
| Annealing සහ Extension | 56~64℃ | තත්පර 20~60 | 40-50 |
qPCR ද්‍රව ප්‍රතික්‍රියාව Syකඳ සකස් කිරීම
|
සංයුතිය |
25µL පරිමාව |
50µL පරිමාව |
අවසාන සාන්ද්රණය |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+නොමිලේ) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 මි.මී |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| DNA සැකිල්ල3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL දක්වා | 50µL දක්වා | —— |
1. ප්‍රයිමර් සඳහා 0.2μM අවසාන සාන්ද්රණය සාමාන්‍යයෙන් හොඳ ප්‍රතිඵල ලබා දෙයි;ප්රතික්රියා කාර්ය සාධනය දුර්වල වූ විට, ප්රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1μM පරාසය තුළ අවශ්‍ය පරිදි සකස් කරන්න.ප්‍රශස්ත සංයෝජන සොයා ගැනීම සඳහා අනුක්‍රමික අත්හදා බැලීම් හරහා විමර්ශන සාන්ද්රණය සාමාන්‍යයෙන් 0.1-0.3μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත වේ.
2. විවිධ වර්ගයේ සැකිලිවල අඩංගු ඉලක්කගත ජානවල පිටපත් අංකය වෙනස් වේ;අවශ්‍ය නම්, ප්‍රශස්ත අච්චු එකතු කිරීමේ ප්‍රමාණය තීරණය කිරීම සඳහා ශ්‍රේණිය තනුක කිරීම සිදු කළ හැක.
3. මෙම පද්ධතිය lyophilized කළ හැක;පාරිභෝගිකයින් ශීත කිරීමේ-වියලීමේ අවශ්‍යතා නොමැතිව මෙම පද්ධතිය භාවිතා කරන විට, 4×lyoprotectant වරණාත්මකව එකතු කළ හැක; ද්‍රව ප්රතික්රියාකාරක අදියර නිෂ්පාදන කාර්ය සාධන වලංගුකරණයේදී ශීත කළ වියලන ලද නිෂ්පාදන අවශ්‍ය නම්, lyophilized පද්ධති සංරචක සමඟ අනුකූලතාව සහතික කිරීම සඳහා එයට 4×lyoprotectant එකතු කළ යුතුය. සහ බලපෑම්.
පද්ධතිය භාවිතා කරන විටd කැටි-වියලීම සඳහා, සූදානම් කරන්න පද්ධති as පහත සඳහන්:
| සංයුතිය | 25µL ප්රතික්රියා පද්ධතිය |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+නොමිලේ) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL දක්වා |
* ශීත කළ වියළීම සඳහා වෙනත් පද්ධති අවශ්‍ය නම්, කරුණාකර වෙනම විමසන්න.
Lyophilization ක්රියාවලියss
| පටිපාටිය | උෂ්ණත්වය | කාලය | තත්ත්වය | පීඩනය |
| පූර්ව ශීත කිරීම | 4℃ | විනාඩි 30 | අල්ලගෙන ඉන්න |
1 atm |
| -50℃ | විනාඩි 60 | සිසිලස | ||
| -50℃ | විනාඩි 180 | අල්ලගෙන ඉන්න | ||
| ප්රාථමික වියළීම | -30℃ | විනාඩි 60 | උණුසුම් කිරීම |
අවසාන රික්තකය |
| -30℃ | විනාඩි 70 | අල්ලගෙන ඉන්න | ||
| ද්විතියික වියළීම | 25℃ | විනාඩි 60 | උණුසුම් කිරීම |
අවසාන රික්තකය |
| 25℃ | විනාඩි 300 | අල්ලගෙන ඉන්න |
2. ඉහත lyophilization ක්රියාවලිය යොමු කිරීම සඳහා පමණි.විවිධ නිෂ්පාදන වර්ග සහ විවිධ කැටි වියළන යන්ත්‍ර විවිධ පරාමිති ඇත, එබැවින් සත්‍යයට අනුව ගැලපීම් කළ හැකියභාවිතය අතරතුර කොන්දේසි.
3. විවිධ lyophilization ක්‍රියාවලීන් විවිධ ප්‍රමාණයේ lyophilized සඳහා සුදුසු විය හැකනිෂ්පාදන, එබැවින් මහා පරිමාණ නිෂ්පාදනය සඳහා භාවිතා කරන විට ප්රමාණවත් පරීක්ෂණ වලංගු කිරීමක් සිදු කළ යුතුය.
lyophilize භාවිතා කිරීම සඳහා උපදෙස්d කුඩු
1. lyophilized කුඩු කෙටියෙන් කේන්ද්රාපසාරී;
2. lyophilized කුඩු වලට nucleic acid template එකතු කර 25µL දක්වා ජලය එක් කරන්න;
3. කේන්ද්රාපසාරී මගින් හොඳින් මිශ්ර කර යන්ත්රය මත ධාවනය කරන්න.
තත්ත්ව පාලනය:
1. ක්රියාකාරී පරීක්ෂණය: සංවේදීතාව, නිශ්චිතභාවය, qPCR හි ප්රතිනිෂ්පාදනය.
2. බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නැත, බාහිර එන්ඩෝ/එක්සෝනියුක්ලීස් දූෂණය නැත.
තාක්ෂණික තොරතුරු:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG නව උණුසුම්-ආරම්භක එන්සයිමයක් භාවිතා කරයි, එය විනාඩි 1 ~ 5 ක් ඇතුළත වේගවත් උණුසුම් ආරම්භයක් සක්‍රීය කරයි;විශේෂ බෆර සූත්‍රගත කිරීම හරහා එය බහු ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR ප්රතික්රියා සඳහා සුදුසු වේ.
2. ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR සීමාව හඳුනාගැනීමේ සංවේදිතාව සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි දියුණු කිරීම, වර්ධක වක්‍ර සාමාන්‍යකරණය කිරීම, ප්‍රතිදීප්ත අගය අඩු සාන්ද්‍රණ සැකිලිවලදී පැහැදිලි දියුණුවක් ලබා ගැනීම, ඉහළ සංවේදීතාව ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR හඳුනාගැනීමේ ප්රතික්රියාකාරක ලෙස යෝග්‍ය වන ඉහළ විශේෂත්වයක් ඇත.
3. අඩු ඇනීලිං උෂ්ණත්වය සහිත හෝ 200bp කොටස් වලට වඩා දිගු ප්‍රයිමර් සඳහා, 3-පියවර ක්‍රමය නිර්දේශ කෙරේ.
4. විවිධ ඉලක්ක ජාන සඳහා dUTP භාවිතා කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව සහ UNG එන්සයිම සඳහා සංවේදීතාව වෙනස් වේ, එබැවින් UNG පද්ධතිය භාවිතා කිරීම හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව අඩුවීමට හේතු වේ නම්, ප්රතික්රියා පද්ධතිය සකස් කර ප්‍රශස්ත කළ යුතුය.තාක්ෂණික සහාය අවශ්‍ය නම් කරුණාකර අපගේ සමාගම අමතන්න.
5. විස්තාරණය කිරීමට පෙර සහ පසු කැප වූ ප්‍රදේශ සහ පයිප්ප භාවිතා කරන්න, ක්‍රියාත්මක වන විට අත්වැසුම් පැළඳීම සහ ඒවා නිතර ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න;PCR නිෂ්පාදන මගින් සාම්පල දූෂණය වීම අවම කිරීම සඳහා PCR සම්පූර්ණ කිරීමෙන් පසු ප්රතික්රියා නළය විවෘත නොකරන්න.
