රනේස් ඒ
Ribonuclease A(RNaseA) යනු 13.7 kDa පමණ වන අණුක බරක් සහිත ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන 4ක් අඩංගු තනි කෙඳි සහිත පොලිපෙප්ටයිඩයකි.RNase A යනු එන්ඩොරිබොනියුක්ලීස් එකක් වන අතර එය C සහ U අවශේෂවල තනි කෙඳි සහිත RNA නිෂේධනය කරයි.නිශ්චිතවම, නියුක්ලියෝටයිඩයක 5'-රයිබෝස් සහ යාබද පිරමිඩීන් නියුක්ලියෝටයිඩයේ 3'-රයිබෝස් මත ඇති පොස්පේට් කාණ්ඩය මගින් සාදන ලද ෆොස්ෆොඩීස්ටර් බන්ධනය බෙදීම හඳුනා ගනී, එවිට 2,3'-චක්‍රීය පොස්පේට් අදාළ 3 ට ජල විච්ඡේදනය වේ. 'නියුක්ලියෝසයිඩ් පොස්පේට් (උදා, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp සහ A-PG ජනනය කිරීම සඳහා RNase A මගින් කපා ඇත).RNase A යනු තනි කෙඳි සහිත RNA බෙදීමේදී වඩාත් ක්‍රියාකාරී වේ.නිර්දේශිත වැඩ සාන්ද්‍රණය 1- 100 μG/mL, විවිධ ප්‍රතික්‍රියා පද්ධති සමඟ අනුකූල වේ.අඩු ලවණ සාන්ද්‍රණය (0-100 mM NaCl) RNA-DNA දෙමුහුන්කරණය මගින් සාදනු ලබන තනි කෙඳි සහිත RNA, ද්විත්ව නූල් RNA සහ RNA දාම කැපීම සඳහා භාවිතා කළ හැක.
කෙසේ වෙතත්, ඉහළ ලවණ සාන්ද්‍රණයකදී (≥0.3 M), RNase A විශේෂිතව තනි කෙඳි සහිත RNA පමණක් වෙන් කරයි.
ප්ලාස්මිඩ් DNA හෝ ජානමය DNA සැකසීමේදී RNA ඉවත් කිරීමට RNase A බහුලව භාවිතා වේ.සකස් කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී DNase සක්‍රීයද නැද්ද යන්න ප්‍රතික්‍රියාවට පහසුවෙන් බලපෑ හැකිය.DNase ක්රියාකාරිත්වය අක්රිය කිරීම සඳහා ජල ස්නානයක තාපාංක කිරීමේ සාම්ප්රදායික ක්රමය භාවිතා කළ හැකිය.මෙම නිෂ්පාදනයේ DNase සහ protease අඩංගු නොවන අතර, භාවිතයට පෙර තාප පිරියම් කිරීම අවශ්ය නොවේ.මීට අමතරව, මෙම නිෂ්පාදනය RNase ආරක්ෂණ විශ්ලේෂණය සහ RNA අනුක්‍රමික විශ්ලේෂණය වැනි අණුක ජීව විද්‍යා පරීක්ෂණ සඳහාද භාවිතා කළ හැක.
ගබඩා කොන්දේසි
නිෂ්පාදිතය වසර 2 ක් සඳහා -25℃~- 15℃ ගබඩා කළ යුතුය.
පිරිවිතර
| පෙනුම | කුඩු |
| ප්රමාණය | 100mg / 1g |
| නිෂ්පාදන වර්ගය | ආර්නාස් ඒ |
උපදෙස්
මෙය RNase A ගබඩා විසඳුම සකස් කිරීමේ පොදු ක්‍රමයකි.එය ද සකස් කළ හැකියරසායනාගාරයේ හෝ විමර්ශන සාහිත්‍යයේ සාම්ප්රදායික ක්‍රම අනුව වෙනත් ක්‍රම මගින් (උදාසෘජුවම 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 හෝ Tris-NaCl ද්‍රාවණයක දියවීම)
1. RNase A ගබඩා විසඳුමක් 10 mg/mL සකස් කිරීම සඳහා 10 mM සෝඩියම් ඇසිටේට් (pH 5.2) භාවිතා කරන්න.
2. විනාඩි 15 ක් සඳහා 100 ℃ රත් කිරීම.
3. කාමර උෂ්ණත්වයට සිසිල් කරන්න, 1 M Tris-HCl (pH 7.4) පරිමාව 1/10 එකතු කරන්න, එහි pH අගය 7.4 (සඳහා) සකසන්නඋදාහරණයක් ලෙස, 500 mL 10 mg/mL RNase ගබඩා විසඳුම 1 M Tris-HCl, pH7.4) එකතු කරන්න.
4. ශීත කළ ගබඩා කිරීම සඳහා -20℃ උප-ඇසුරුම් කර ඇත, එය වසර 2 ක් දක්වා ස්ථාවර විය හැක.
[සටහන්]:
උදාසීන තත්ව යටතේ RNaseA ද්‍රාවණය තාපාංක කරන විට, RNase වර්ෂාපතනය ඇතිවේ;එය අඩු pH අගයකින් තම්බා, වර්ෂාපතනයක් තිබේ නම්, එය නිරීක්ෂණය කළ හැකිය, එය ප්රෝටීන් අපද්රව්ය ඇතිවීම නිසා ඇති විය හැක.තාපාංකයෙන් පසු අවසාදිතය හමු වුවහොත්, අධිවේගී කේන්ද්‍රාපසාරී (13000rpm) මගින් අපද්රව්ය ඉවත් කළ හැකි අතර පසුව ශීත කළ ගබඩා කිරීම සඳහා උප-ඇසුරුම් කළ හැක.
සටහන්
කරුණාකර ඔබේ සෞඛ්‍යය සහ ආරක්ෂාව සහතික කිරීම සඳහා අවශ්ය PPE, එවැනි රසායනාගාර කබාය සහ අත්වැසුම් පැළඳ ගන්න.
