Rnase Inhibitor (ග්ලිසරෝල් රහිත)
Murine RNase inhibitor යනු E.coli වලින් ප්‍රකාශ කර පිරිසිදු කරන ලද ප්‍රතිසංයෝජක murine RNase inhibitor වේ.එය සහසංයුජ නොවන බන්ධන හරහා 1:1 අනුපාතයකින් RNase A, B හෝ C වෙත බන්ධනය වන අතර එමඟින් එන්සයිම තුනේ ක්රියාකාරිත්වය වළක්වන අතර RNA ක්ෂය වීමෙන් ආරක්ෂා කරයි.කෙසේ වෙතත්, එය Aspergillus වෙතින් RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H හෝ RNase වලට එරෙහිව ඵලදායී නොවේ.Murine RNase inhibitor RT-PCR, RT-qPCR සහ IVT mRNA මගින් පරීක්ෂා කරන ලද අතර, විවිධ වාණිජ ප්‍රතිලෝම පිටපත්, DNA පොලිමරේස් සහ RNA පොලිමරේස් සමඟ අනුකූල විය.
මානව RNase inhibitors හා සසඳන විට, murine RNase inhibitor හි නිෂේධකය අක්‍රිය කිරීමට හේතු වන ඔක්සිකරණයට ඉතා සංවේදී cysteine දෙකක් අඩංගු නොවේ.එය DTT හි අඩු සාන්ද්‍රණයක (1 mM ට අඩු) ස්ථායී කරයි.මෙම විශේෂාංගය එය DTT හි ඉහළ සාන්ද්‍රණය ප්‍රතික්‍රියාවට අහිතකර වන ප්‍රතික්‍රියා වලදී භාවිතා කිරීමට සුදුසු වේ (උදා: තත්‍ය කාලීන RT-PCR).
Aඅයදුම්පත්රය
RNA හායනය වැලැක්වීම සඳහා RNase මැදිහත්වීම් හැකි ඕනෑම පරීක්ෂණයකදී මෙම නිෂ්පාදනය බහුලව භාවිතා කළ හැක, එනම්:
1.First-strand cDNA සංස්ලේෂණය, RT-PCR, RT-qPCR, ආදිය;
2. in-vitro පිටපත් කිරීම/පරිවර්තනය (උදා: vitro in vitro ප්‍රතිනිර්මාණය) වලදී RNA පිරිහීමෙන් ආරක්ෂා කරන්න;
3.RNA හුදකලා කිරීමේදී සහ පිරිසිදු කිරීමේදී RNase ක්‍රියාකාරකම් වලක්වාලීම.
ගබඩා කොන්දේසි
-25～-15℃ ගබඩා කරන්න;
ෆ්රීස්-තව් චක්ර ≤ 5 වතාවක්;
වසර 1 ක් සඳහා වලංගු වේ.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
RNase A හි 5 ng ක්රියාකාරිත්වය 50% කින් නිෂේධනය කිරීමට අවශ්‍ය RNase Inhibitor ප්‍රමාණය ලෙස එක් ඒකකයක් අර්ථ දක්වා ඇත.
අණුක බර
RNase Inhibitor (Glycerol-free) යනු 50 kDa ප්‍රෝටීනයකි.
තත්ත්ව පාලනය
Exonuclease ක්‍රියාකාරකම්:
1 μg λ-Hind III digest DNA සමඟ 40 U එන්සයිම 37 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා ඉන්කියුබේෂන් කිරීම ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් මගින් තීරණය කරන ලද DNA වල හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවීය.
Endonuclease ක්රියාකාරිත්වය:
40 U එන්සයිම 1 μg λ DNA සමඟ පැය 16ක් 37°C උෂ්ණත්වයකදී ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් ජෙල් විද්‍යුත් විච්ඡේදනය මගින් තීරණය කරන ලද DNA වල හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවීය.
නිකිං ක්‍රියාකාරකම්:
40 U එන්සයිම 1 μg pBR322 සමඟ පැය 16ක් 37℃ ට ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් මගින් තීරණය කරන ලද DNA වල හඳුනාගත හැකි පරිහානිය සිදු නොවීය.
RNase ක්රියාකාරිත්වය:
40 U එන්සයිම 1.6 μg MS2 RNA සමඟ පැය 4ක් 37℃ ට ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් මගින් තීරණය කරන ලද පරිදි RNA හි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවීය.
E.coli DNA:
40 U එන්සයිම TaqMan qPCR මගින් අනාවරණය වේ.E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U වේ.
Notes
1.එන්සයිම අක්‍රිය වීම වැළැක්වීම සඳහා සොලවන්න හෝ ප්‍රචණ්ඩ ලෙස කලවම් නොකරන්න.
2.RNase inhibitor 25℃ සිට 55℃ දක්වා උෂ්ණත්වවලදී ක්‍රියාකාරී වන අතර ≥65℃ දී අක්‍රිය වේ.
3.RNase H, RNase 1, සහ RNase T1 වල ක්‍රියාකාරකම් වලක්වනු නොලැබේ.
4. RNase ක්‍රියාකාරකම් නිෂේධනය කිරීම සඳහා වන pH පරාසය පුළුල් වේ (pH 5-9 දී ක්‍රියාකාරී), pH 7-8 හි උපරිම ක්‍රියාකාරකම් ප්‍රදර්ශනය කරයි.
