Hotstart Taq DNA පොලිමරේස්
Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody modification) යනු Thermus aquaticus YT-1 වෙතින් වන උණුසුම්-ආරම්භක තාප ස්ථායී DNA පොලිමරේස් වේ, එහි 5′→3′ පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම් සහ 5´ ෆ්ලැප් එන්ඩොනියුක්ලීස් ක්‍රියාකාරකම් ඇත.උණුසුම්-ආරම්භක Taq DNA පොලිමරේස් යනු තාපගතික Taq ප්රතිදේහ මගින් වෙනස් කරන ලද Taq DNA පොලිමරේස් වේ.ප්රතිදේහ වෙනස් කිරීම PCR හි නිශ්චිතභාවය, සංවේදීතාව සහ අස්වැන්න වැඩි විය.
සංරචක
| සංරචකය | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq බෆරය | 4×1 මිලි | 4 × 10 මිලි | 4×50 මිලි | 5 × 400 මිලි |
| Hot Start Taq DNA පොලිමරේස් (ප්රතිදේහ වෙනස් කරන ලදි) (5 U/μL) | 0.1 මිලි | 1 මිලි | 5 මිලි | 10×5 මිලි |
අයදුම්පත්
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 සහ 50% Glycerol.
ගබඩා තත්ත්වය
0°C ට අඩු ප්‍රවාහනය සහ -25°C~-15°C දී ගබඩා කළ යුතුය.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් යනු 75°C උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 30 කින් dNTP 15 nmol අම්ල ද්‍රාව්‍ය ද්‍රව්‍යයට ඇතුළත් කරන එන්සයිම ප්රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.
තත්ත්ව පාලනය
1.Endonuclease ක්‍රියාකාරකම්:20 U එන්සයිම 4 μg pUC19 DNA සමඟ පැය 4ක් 37℃ ට ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් මගින් තීරණය කරන ලද DNA වල හඳුනාගත හැකි පරිහානිය සිදු නොවීය.
2.5 kb Lambda PCR:200 µM dNTPs සහ 0.2 µM ප්‍රයිමර් ඉදිරියේ Taq DNA පොලිමරේස් ඒකක 1.25ක් සමඟ 5 ng Lambda DNA වල PCR විස්තාරණ චක්‍ර 25ක් අපේක්ෂිත 5 kb නිෂ්පාදනයක් ලබා දෙයි.
3.Exonuclease ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 12.5 U Taq DNA Polymerase අඩංගු 50 µl ප්‍රතික්‍රියාවක් 10 nmol 5´-FAM ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ සමඟ විනාඩි 30ක් 37℃ අස්වැන්නක් ලබා දීමෙන් හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් නොලැබේ.
4.RNase ක්‍රියාකාරකම්:37 ° C දී පැය 2 ක් සඳහා 1μg RNA පිටපත් සමඟ එන්සයිම 20 U අඩංගු 10 µL ප්‍රතික්‍රියාවක් ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් ජෙල් විද්‍යුත් විච්ඡේදනය මගින් තීරණය කරන ලද පරිදි RNA හි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවීය.
5.තාප අක්රිය වීම:නැත.
ප්රතික්රියා පද්ධතිය
| සංරචක | පරිමාව |
| DNA සැකිල්ලa | විකල්ප |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| 10 μM ප්‍රතිලෝම ප්‍රයිමර් | 0.5 μL |
| dNTP මිශ්‍රණය (මිලිමීටර් 10 බැගින්) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq බෆරය | 5 μL |
| Taq DNA පොලිමරේස්බී(5U/μL) | 0.125 μL |
| න්යෂ්ටික රහිත ජලය | 25 μL දක්වා |
සටහන්:
1) a.
| DNA | ප්රමාණය |
| ජානමය | 1 ng-1 μg |
| ප්ලාස්මිඩ් හෝ වෛරස් | 1 pg-1 ng |
2) ආ.Taq DNA Polymerase හි ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය විශේෂිත යෙදුම්වල ඒකක 5-50/mL (ඒකක 0.1-0.5/25 µL ප්‍රතික්‍රියාව) දක්වා පරාසයක පවතී.
තාප පාපැදි ප්රොටෝකෝලය
PCR
| පියවර | උෂ්ණත්වය(°C) | කාලය | සයිකල් |
| ආරම්භක denaturationa | 95℃ | විනාඩි 1-3 | - |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 15-30 | 30-35 සයිකල් |
| නිර්වින්දනයබී | 45-68 ℃ | 15-60 තත් | |
| දිගු කිරීම | 68℃ | 1kb/min | |
| අවසාන දිගුව | 68℃ | විනාඩි 5 | - |
සටහන්:
1) බොහෝ විස්තාරණයන් සඳහා 95°C දී මිනිත්තු 1 ක ආරම්භක denaturation ප්රමාණවත් වේ.දුෂ්කර සැකිලි සඳහා, 95 ° C දී මිනිත්තු 2-3 ක දිගු නිරාකරණයක් නිර්දේශ කෙරේ.යටත් විජිත PCR සමඟ, 95 ° C දී ආරම්භක මිනිත්තු 5 denaturation නිර්දේශ කෙරේ.
2) නිර්වින්දන පියවර සාමාන්‍යයෙන් තත්පර 15-60 කි.ප්‍රාථමික යුගලයේ Tm මත ඇනීලිං උෂ්ණත්වය පදනම් වන අතර සාමාන්‍යයෙන් 45-68℃ වේ.
