2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
බළලා අංකය: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) නිර්මාණය කර ඇත්තේ DNA නිස්සාරණය හෝ නියැදි සකස් කිරීමකින් තොරව සාම්පල වලින් කෙලින්ම PCR සිදු කිරීමටය.මෙම ප්රතික්රියාකාරකය උණුසුම්-ආරම්භක DNA පොලිමරේස්, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl වලින් සමන්විත වේ.2, dNTPs (dTTP වෙනුවට dUTP සමඟ), සහ ප්‍රමාණාත්මක PCR (qPCR) සඳහා ස්ථායීකාරක.මෙම ප්රතික්රියාකාරකය ඉහළ නිෂේධක-ඉවසීමක් ඇති කරයි, එබැවින් එය DNA නිස්සාරණයකින් තොරව උගුරේ ස්පුබ්, කෙල, ප්‍රති-කැටි ගැසුණු සම්පූර්ණ රුධිරය, ප්ලාස්මා සහ සෙරුමය වැනි සාම්පල හඳුනාගැනීම සඳහා කෙලින්ම යෙදිය හැකිය.ප්රතික්රියාකාරකය ප්‍රති-නිරෝධක DNA පොලිමරේස් සහ UNG එන්සයිම මිශ්ර එන්සයිම සහිත qPCR සඳහා හිමිකාර බෆරය භාවිතා කරයි.එබැවින්, එයට නිෂේධක අඩංගු සාම්පලවල ඉලක්කගත ජානවල හොඳ විස්තාරණයක් ලබා ගත හැකි අතර PCR අවශේෂ සහ වායුගෝලීය දූෂණය නිසා ඇති වන ව්‍යාජ ධනාත්මක විස්තාරණය වළක්වයි.මෙම ප්රතික්රියාකාරකය ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති, Eppendorf, Bio-Rad, Roche යනාදී බොහෝ ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණ සමඟ අනුකූල වේ.
සංරචක
1. 50×SensiDirect එන්සයිම/UNG මිශ්‍රණය
2. 2×SensiDirect Premix බෆරය (dUTP)
ගබඩා කොන්දේසි
සියලුම සංරචක දිගුකාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා -20℃ සහ මාස 3 දක්වා 4℃ තබා ගත යුතුය.කරුණාකර භාවිතා කිරීමට පෙර දියවීම සහ කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසුව තරයේ මිශ්ර කරන්න.නිතර කැටි ගැසීමෙන් වළකින්න.
පාපැදි ප්රොටෝකෝලය
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | චක්රය |
| ජීර්ණය | 50℃ | විනාඩි 2 | 1 |
| පොලිමරේස් සක්රිය කිරීම | 95℃ | විනාඩි 1-5 | 1 |
| ඩෙනේචර් | 95℃ | 10-20 තත් | 40-50 |
| Annealing/Extension | 56-64℃ | 20-60 ගණන්වල |
නල මාර්ග උපදෙස්
| ප්රතික්රියාකාරකය | පරිමාව අනුව ප්රතික්රියාව | ප්‍රතික්‍රියාවකට පරිමාව | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 2×SensiDirect Premix බෆරය (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect එන්සයිම/UNG මිශ්‍රණය | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| නියැදිය3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| මුළු පරිමාව | 25 μL | 50 μL | - |
1. ප්‍රාථමිකයේ අවසාන සාන්ද්රණය සාමාන්‍යයෙන් 0.2μM වේ.වඩා හොඳ ප්‍රතිඵල සඳහා, ප්‍රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක.
2. සාමාන්‍යයෙන්, පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය 0.1-0.3μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක.ප්‍රොබ් එකේ ප්‍රශස්ත සාන්ද්රණය තත්‍ය කාලීන PCR විස්තාරණ උපකරණය, පරීක්ෂණ වර්ගය සහ ප්‍රතිදීප්ත ලේබල් කිරීමේ ද්‍රව්‍ය වර්ගයට සම්බන්ධ වේ.කරුණාකර උපකරණ අත්පොත හෝ එක් එක් ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණයක නිශ්චිත අවශ්‍යතා වෙත යොමු වන්න.
3. විවිධ වර්ගයේ සාම්පලවල විවිධ වර්ග සහ නිෂේධකයේ අන්තර්ගතය සහ ඉලක්කගත ජානයේ පිටපත් අංකය අඩංගු වේ.නියැදි පරිමාව සැබෑ තත්ත්වය අනුව සලකා බැලිය යුතුය.අවශ්‍ය නම්, න්‍යෂ්ටික රහිත ජලය හෝ TE බෆරය එකතු කිරීමෙන් නියැදිය තනුක කරන්න.
4. විවිධ සාම්පලවල නිර්දේශිත පරිමාව:
| නියැදිය | එක 50 සඳහා පරිමාව μL ප්රතික්රියාව | උපරිම අනුපාතය |
| ප්රතිදේහගත සම්පූර්ණ රුධිරය | 2.5 μL | 5% |
| ප්ලාස්මා | 15 μL | 30% |
| සෙරුමය | 10 μL | 20% |
| උගුරේ තුවාලය | 10 μL | 20% |
| කෙල | 10 μL | 20% |
තත්ත්ව පාලනය
1. කාර්යය හඳුනාගැනීම: qPCR හි සංවේදීතාව, නිශ්චිතභාවය සහ පුනරාවර්තනය.
2. බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නොමැත: බාහිර අන්තරාසර්ග සහ එක්සෝනියුක්ලීස් දූෂණය නොමැත.
නිෂ්පාදන සටහන්
1. මෙම නිෂ්පාදනය නව ආකාරයේ උණුසුම්-ආරම්භක DNA පොලිමරේස් භාවිතා කරයි, එය විනාඩි 1-5 කින් සක්රිය කළ හැකිය. එහි ප්‍රතික්‍රියා බෆරය ප්‍රශස්ත කර ඇති බැවින්, එය පරීක්ෂණ ක්‍රමය භාවිතයෙන් ද්විත්ව හෝ බහු ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR සඳහා වඩාත් සුදුසු වේ.
2. PCR වර්ධකයේ Rn අගය ඉතා අඩු නම් හෝ විස්තාරණය පැහැදිලිවම අවහිර වී ඇත්නම්, නියැදි ප්‍රමාණය අඩු කිරීම, ප්‍රතික්‍රියා පරිමාව වැඩි කිරීම හෝ නියැදිය කලින් තනුක කිරීම ප්‍රතිඵල වැඩිදියුණු කළ හැක.
3. රුධිරය, කෙළ, මුත්‍රා, උගුරේ තුවාලය ආදිය එකතු කිරීම සායනික නිර්ණායක අවශ්‍යතා අනුගමනය කළ යුතු අතර, න්‍යෂ්ටික අම්ල පිරිහීම වැළැක්වීම සඳහා නැවුම් සාම්පලයක් භාවිතා කළ හැකිය.
4. විවිධ ඇම්ප්ලිකොනවල dUTP වෙත විවිධ භාවිත කාර්යක්ෂමතාව සහ UNG වෙත සංවේදීතාව ඇති බැවින්, UNG පද්ධතිය භාවිතා කරන විට හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව අඩු වුවහොත් ප්‍රතික්‍රියාකාරක ප්‍රශස්ත කළ යුතුය.අවශ්‍ය නම් තාක්ෂණික සහාය සඳහා කරුණාකර අප හා සම්බන්ධ වන්න.
5. එක්-පියවර ප්‍රතික්‍රියා අතර ප්‍රවාහන PCR නිෂ්පාදන විස්තාරණය කිරීම වැළැක්වීම සඳහා, විස්තාරණය සඳහා කැප වූ පර්යේෂණාත්මක ප්‍රදේශයක් සහ පයිප්පයක් අවශ්‍ය වේ.අත්වැසුම් සමඟ ක්‍රියා කිරීම සහ නිතර නිතර වෙනස් කිරීම සහ PCR විස්තාරණය කිරීමෙන් පසු ප්‍රතික්‍රියා නළය විවෘත නොකරන්න.
