ප්‍රෝටීන් K NGS (කුඩු)
බළලා අංකය: HC4507A
NGS Protease K යනු ඉහළ එන්සයිම ක්‍රියාකාරීත්වයක් සහ පුළුල් උපස්ථර විශේෂත්වයක් සහිත ස්ථායී සෙරීන් ප්‍රෝටීස් වර්ගයකි. මෙම එන්සයිමය හයිඩ්‍රොෆෝබික් ඇමයිනෝ අම්ල, සල්ෆර් අඩංගු ඇමයිනෝ අම්ල සහ ඇරෝමැටික ඇමයිනෝ අම්ලවල C-පර්යන්තයට යාබදව ඇති එස්ටර බන්ධන සහ පෙප්ටයිඩ බන්ධන වඩාත් කැමති ලෙස වියෝජනය කරයි.එබැවින්, එය බොහෝ විට ප්‍රෝටීන කෙටි පෙප්ටයිඩ බවට පිරිහීමට යොදා ගනී.NGS Protease K යනු Asp සමඟ සාමාන්‍ය සෙරීන් ප්‍රෝටීස් වර්ගයකි39-ඔහුගේ69-සර්224සෙරීන් ප්‍රෝටීස් වලට අනන්‍ය වූ උත්ප්‍රේරක ත්‍රිත්වය, සහ උත්ප්‍රේරක මධ්‍යස්ථානය වට කර ඇත්තේ Ca2+ස්ථායීකරනය සඳහා බන්ධන අඩවි, පුළුල් පරාසයක තත්වයන් යටතේ ඉහළ එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය පවත්වා ගැනීම.
පිරිවිතර
| පෙනුම | සුදු සිට සුදු පැහැති අස්ඵටික කුඩු, lyophilized |
| විශේෂිත ක්රියාකාරිත්වය | ≥40U/mg ඝන |
| DNase | කිසිවක් අනාවරණය නොවීය |
| RNase | කිසිවක් අනාවරණය නොවීය |
| Bioburden | ≤50CFU/g ඝන |
| න්යෂ්ටික අම්ල අවශේෂ | <5pg/mg ඝන |
දේපළ
| මූලාශ්රය | Tritirachium ඇල්බමය |
| EC අංකය | 3.4.21.64(Tritirachium ඇල්බමයෙන් Recombinant) |
| අණුක බර | 29kDa (SDS-PAGE) |
| සම විද්‍යුත් ලක්ෂ්‍යය | 7.81 Fig.1 |
| ප්රශස්ත pH අගය | 7.0-12.0 (සියල්ලම ඉහළ ක්‍රියාකාරකම් සිදු කරයි) Fig.2 |
| ප්රශස්ත උෂ්ණත්වය | 65℃ Fig.3 |
| pH ස්ථායීතාවය | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| තාප ස්ථායීතාවය | 50℃ ට අඩු (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| ගබඩා ස්ථාවරත්වය | මාස 12ක් සඳහා 25℃ හි ගබඩා කර ඇත Fig.6 |
| සක්රිය කරන්නන් | SDS, යූරියා |
| නිෂේධක | ඩයිසොප්රොපයිල් ෆ්ලෝරෝෆොස්පේට්;benzylsulfonyl ෆ්ලෝරයිඩ් |
ගබඩා කොන්දේසි
Lyophilized කුඩු -25~-15 ℃ දී ආලෝකයෙන් දිගු කාලයක් ගබඩා කරන්න;විසුරුවා හැරීමෙන් පසු, ඇල්කොට් ආලෝකයෙන් 2-8℃ කෙටි කාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා සුදුසු පරිමාවකට හෝ ආලෝකයෙන් -25~-15 ℃ දී දිගුකාලීන ගබඩා කිරීම.
පූර්වාරක්‍ෂා
භාවිතා කරන විට හෝ බර කිරන විට ආරක්ෂිත අත්වැසුම් සහ ඇස් කණ්ණාඩි පළඳින්න, භාවිතයෙන් පසු හොඳින් වාතාශ්‍රය තබා ගන්න.මෙම නිෂ්පාදනය සමේ ආසාත්මිකතා ප්රතික්රියාවක් සහ බරපතල අක්ෂි කෝපයක් ඇති කළ හැකිය.ආශ්වාස කළහොත්, අසාත්මිකතා හෝ ඇදුම රෝග ලක්ෂණ හෝ හුස්ම හිරවීම ඇති විය හැක.ශ්වසන කෝපයක් ඇති විය හැක.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
NGS Protease K හි එක් ඒකකයක් සම්මත නිර්ණය තත්ත්ව යටතේ කැසීන් 1 μmol L-tyrosine බවට ජල විච්ඡේදනය කිරීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.
ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම
| ප්රතික්රියාකාරකය | නිෂ්පාදක | නාමාවලිය |
| කැසීන් තාක්ෂණිකහරක් කිරි වලින් | සිග්මා ඕල්ඩ්රිච් | C7078 |
| NaOH | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2එච්2O | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| ට්රයික්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| සෝඩියම් ඇසිටේට් | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| ඇසිටික් අම්ලය | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| එච්.සී.එල් | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| සෝඩියම් කාබනේට් | සිනෝෆාම් රසායනිකReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-ෆීනෝල් | Sangon Biotech (ෂැංහයි)සීමිත සමාගම. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | සිග්මා | 93829 |
ප්රතික්රියාකාරක I:
උපස්ථරය: ගව කිරි ද්‍රාවණයෙන් 1% කේසීන්: 0.1M සෝඩියම් පොස්පේට් ද්‍රාවණයක, pH 8.0 මිලිලීටර් 50ක හරක් කිරි කැසීන් ග්‍රෑම් 1ක් දියකර, 65-70 °C ජල ස්නානයක විනාඩි 15ක් රත් කරන්න, කලවම් කර දියකර, ජලයෙන් සිසිල් කරන්න, සකස් කර ගන්න. සෝඩියම් හයිඩ්‍රොක්සයිඩ් pH අගය 8.0 දක්වා සහ මිලි ලීටර් 100 දක්වා තනුක කරන්න.
ප්රතික්රියාකාරක II:
TCA ද්රාවණය: 0.1M ට්රයික්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය, 0.2M සෝඩියම් ඇසිටේට් සහ 0.3M ඇසිටික් අම්ලය (බර ග්‍රෑම් 1.64 ට්රයික්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය + 1.64g සෝඩියම් ඇසිටේට් + 1.724mL ඇසිටික් අම්ලය අනුක්‍රමිකව, HCl deionized ජලයට 50mL එකතු කර, එච්. මිලි ලීටර් 100).
ප්රතික්රියාකාරක III:
0.4m සෝඩියම් කාබනේට් ද්රාවණය (බර 4.24g නිර්ජලීය සෝඩියම් කාබනේට් සහ 100mL ජලයේ දියකරන්න)
ප්රතික්රියාකාරක IV:
Folin phenol ප්රතික්රියාකාරකය: deionized ජලය සමග 5 වතාවක් තනුක.
ප්රතික්රියාකාරක V:
එන්සයිම තනුක: 0.1 M සෝඩියම් පොස්පේට් ද්රාවණය, pH 8.0.
ප්රතික්රියාකාරක VI:
L-tyrosine සම්මත ද්රාවණය: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl සමඟ දියවී ඇත.
පටිපාටිය
1. UV-Vis වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානය ක්‍රියාත්මක කර ඡායාරූපමිතික මිනුම් තෝරන්න.
2. තරංග ආයාමය 660nm ලෙස සකසන්න.
3. ජල ස්නානය සක්රිය කරන්න, උෂ්ණත්වය සෙල්සියස් අංශක 37 ට සකසන්න, විනාඩි 3-5 ක් සඳහා උෂ්ණත්වය නොවෙනස්ව පවතින බව සහතික කරන්න.
4. 37℃ ජල ස්නානයක 2mL කේන්ද්රාපසාරී නලයක 0.5mL උපස්ථරයක් විනාඩි 10ක් පෙර රත් කරන්න.
5. මිනිත්තු 10 ක් සඳහා පෙර රත් කරන ලද කේන්ද්රාපසාරී නලයට 0.5mL තනුක එන්සයිම ද්රාවණය නිස්සාරණය කරන්න.එන්සයිම තනුක හිස් කණ්ඩායමක් ලෙස සකසන්න.
6. ප්රතික්රියාවෙන් පසු වහාම 1.0 mL TCA ප්රතික්රියාකාරකයක් එකතු කරන්න.හොඳින් මිශ්ර කර විනාඩි 30 ක් ජල ස්නානයක තබන්න.
7. කේන්ද්රාපසාරී ප්රතික්රියා විසඳුම.
8. නිශ්චිත අනුපිළිවෙලෙහි පහත සඳහන් සංරචක එකතු කරන්න.
| ප්රතික්රියාකාරකය | පරිමාව |
| සුපර්නැටන්ට් | 0.5 මිලි |
| 0.4M සෝඩියම් කාබනේට් | 2.5 මිලි |
| Folin phenol ප්රතික්රියාකාරකය | 0.5 මිලි |
9. 37℃ ජල ස්නානයක විනාඩි 30ක් පුර්ව ගැන්වීමට පෙර හොඳින් මිශ්ර කරන්න.
10. OD660OD ලෙස තීරණය විය1;හිස් පාලන කණ්ඩායම: OD තීරණය කිරීම සඳහා එන්සයිම ද්රාවණය ප්‍රතිස්ථාපනය කිරීමට එන්සයිම තනුක භාවිතා කරයි660OD ලෙස2, ΔOD=OD1-ඕඩී2.
11. L-tyrosine සම්මත වක්‍රය: 0.5mL විවිධ සාන්ද්‍රණ L-tyrosine ද්රාවණය, 2.5mL 0.4M සෝඩියම් කාබනේට්, 0.5mL Folin phenol ප්රතික්රියාකාරකය 5mL කේන්ද්රාපසාරී නලයේ, විනාඩි 30ක් සඳහා 37℃ තුළ පුර්වාතනය කරන්න, OD සඳහා හඳුනා ගන්න660L-tyrosine හි විවිධ සාන්ද්‍රණය සඳහා, පසුව සම්මත වක්‍රය Y=kX+b ලබා ගන්නා ලදී, මෙහි Y යනු L-tyrosine සාන්ද්‍රණය, X යනු OD වේ600.
ගණනය කිරීම
2: ප්රතික්රියා ද්‍රාවණයේ සම්පූර්ණ පරිමාව (mL)
0.5: එන්සයිම ද්‍රාවණයේ පරිමාව (mL)
0.5: වර්ණදේහ නිර්ණය (mL) සඳහා භාවිතා කරන ප්රතික්රියා ද්රව පරිමාව
10: ප්රතික්රියා කාලය (මිනි)
Df: තනුක බහු
C: එන්සයිම සාන්ද්‍රණය (mg/mL)
සංඛ්යා
Fig.1 DNA අවශේෂ
| නියැදිය | Ave C4 | න්යෂ්ඨික අම්ල ප්‍රතිසාධනය (pg/mg) | ප්‍රතිසාධනය (%) | සම්පූර්ණ න්යෂ්ටික අම්ලය ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 කි | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 කි | 126.728 කි | - | - |
| ලිංගාශ්‍රිත රෝග 1 | 12.955 කි |
- |
- |
- |
| ලිංගාශ්‍රිත රෝග 2 | 16 | |||
| ලිංගාශ්‍රිත රෝග 3 | 19.125 කි | |||
| ලිංගාශ්‍රිත රෝග 4 | 23.135 කි | |||
| ලිංගාශ්‍රිත රෝග 5 | 26.625 කි | |||
| RNA-නිදහස් H2O | තීරණය නොකළ | - | - | - |
Fig.2 ප්රශස්ත pH අගය
Fig.3 ප්රශස්ත උෂ්ණත්වය
Fig.4 pH ස්ථායීතාවය
Fig.5 තාප ස්ථායීතාවය
Fig.6 25℃ හි ගබඩා ස්ථායිතාව
