Mouse Genotyping කට්ටලය

බළලා අංකය: HCR2021A

මෙම නිෂ්පාදනය DNA බොරතෙල් නිස්සාරණය සහ PCR වර්ධක පද්ධතිය ඇතුළුව මූසික ප්‍රවේණි වර්ග වේගයෙන් හඳුනාගැනීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති කට්ටලයකි.Lysis Buffer සහ Proteinase k මගින් සරල කැඩීමකින් පසු මූසික වලිගය, කන්, ඇඟිලි සහ අනෙකුත් පටක වලින් කෙලින්ම PCR විස්තාරණය සඳහා නිෂ්පාදනය භාවිතා කළ හැක.එක රැයකින් දිරවීම, ෆීනෝල්-ක්ලෝරෝෆෝම් නිස්සාරණය හෝ තීරු පිරිසිදු කිරීම සිදු නොවේ, එය සරල වන අතර අත්හදා බැලීම්වල කාලය කෙටි කරයි.නිෂ්පාදිතය ඉලක්ක කොටස් 2kb දක්වා විස්තාරණය කිරීමට සහ ප්‍රයිමර් යුගල 3ක් දක්වා බහුප්‍රමාණය PCR ප්‍රතික්‍රියා සඳහා සුදුසු වේ.2×Mouse Tissue Direct PCR මිශ්‍රණයේ ජානමය වශයෙන් නිර්මාණය කරන ලද DNA පොලිමරේස්, Mg අඩංගු වේ.²⁺, dNTPs සහ ඉහළ විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාවයක් සහ නිෂේධක ඉවසීමක් ලබා දීම සඳහා ප්‍රශස්ත බෆර පද්ධතියක්, එම නිසා PCR ප්‍රතික්‍රියා අච්චුව සහ ප්‍රයිමර් එකතු කිරීමෙන් සහ නිෂ්පාදනය 1× දක්වා ප්‍රතිහරණය කිරීමෙන් සිදු කළ හැක.මෙම නිෂ්පාදනය සමඟ විස්තාරණය කරන ලද PCR නිෂ්පාදනය 3′ කෙළවරේ කැපී පෙනෙන "A" පදනමක් ඇති අතර පිරිසිදු කිරීමෙන් පසු TA ක්ලෝන කිරීම සඳහා සෘජුවම භාවිතා කළ හැක.

සංරචක

ගබඩා කොන්දේසි

නිෂ්පාදන වසර 2 ක් සඳහා -25~-15℃ ගබඩා කළ යුතුය.දියවීමෙන් පසු, Lysis Buffer කෙටි කාලීන බහු භාවිතය සඳහා 2~8℃ දී ගබඩා කළ හැකි අතර, භාවිතා කරන විට හොඳින් මිශ්ර කරන්න.

අයදුම්පත

මෙම නිෂ්පාදනය මූසික knockout විශ්ලේෂණය, transgenic හඳුනාගැනීම, genotyping සහ යනාදිය සඳහා සුදුසු වේ.

විශේෂාංග

1.සරල මෙහෙයුම: ජානමය DNA නිස්සාරණය කිරීමට අවශ්ය නැත;

2.පුළුල් යෙදුම: විවිධ මූසික පටක සෘජු විස්තාරණය සඳහා සුදුසු වේ.

උපදෙස්

1.ජානමය DNA මුදා හැරීම

1) ලයිසේට් සකස් කිරීම

පටක ලයිසේට් ලයිස් කළ යුතු මූසික සාම්පල ගණන අනුව සකස් කර ඇත (පටක ලයිසේට් මාත්‍රාව අනුව වෙබ් අඩවියේ සකස් කළ යුතු අතර භාවිතය සඳහා තරයේ මිශ්‍ර කළ යුතුය), සහ තනි නියැදියකට අවශ්‍ය ප්‍රතික්‍රියාකාරකවල අනුපාතය පහත පරිදි වේ:

2) නියැදි සකස් කිරීම සහ ලිසිස්

නිර්දේශිත පටක භාවිතය

පිරිසිදු කේන්ද්‍රාපසාරී නල වල මූසික පටක සාම්පල සුදුසු ප්‍රමාණයක් ගෙන, එක් එක් කේන්ද්‍රාපසාරී නලයට නැවුම් පටක ලයිසේට් 200μL එකතු කර, සුලිය සහ සොලවන්න, ඉන්පසු විනාඩි 30ක් 55℃ ට ඉන්කියුබේට් කරන්න, ඉන්පසු විනාඩි 3ක් සඳහා 98℃ රත් කරන්න.

3) කේන්ද්රාපසාරණය

ලයිසේට් හොඳින් සොලවා විනාඩි 5ක් සඳහා 12,000 rpm දී කේන්ද්‍රාපසාරී කරන්න.PCR විස්තාරණය සඳහා අච්චුව ලෙස අධිප්‍රනාටකය භාවිතා කළ හැක.සැකිල්ල ගබඩා කිරීම සඳහා අවශ්‍ය නම්, අධි ප්‍රවාහය වෙනත් වඳ කේන්ද්‍රාපසාරී නලයකට මාරු කර සති 2ක් සඳහා -20℃ ගබඩා කරන්න.

2.PCR විස්තාරණය

-20℃ සිට 2×Mouse Tissue Direct PCR මිශ්‍රණය ඉවත් කර අයිස් මත දියකර, උඩු යටිකුරු කර, පහත වගුවට අනුව PCR ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය සකස් කරන්න (අයිස් මත ක්‍රියා කරන්න):

සටහන:

අ) එකතු කරන ලද ප්‍රමාණය පද්ධතියේ 1/10 නොඉක්මවිය යුතු අතර, වැඩිපුර එකතු කළහොත්, PCR විස්තාරණය වැළැක්විය හැකිය.

නිර්දේශිත PCR කොන්දේසි

සටහන:

අ) ප්‍රාථමික උෂ්ණත්වය: ප්‍රාථමිකයේ Tm අගයට අදාළව, ප්‍රාථමිකයේ +3~5℃ හි කුඩා Tm අගයට ඇනීලිං උෂ්ණත්වය සැකසීම නිර්දේශ කෙරේ.

පොදු ගැටළු සහ විසඳුම්

1.ඉලක්කගත තීරු නොමැත

1) අධික ලිසිස් නිෂ්පාදනය.සාමාන්‍යයෙන් පද්ධතියේ 1/10 ට වඩා වැඩි නොවන වඩාත් සුදුසු අච්චුව තෝරන්න;

2) ඉතා විශාල සාම්පල ප්‍රමාණය.ලයිසේට් 10 වතාවක් තනුක කර පසුව විස්තාරණය කරන්න, නැතහොත් නියැදි ප්‍රමාණය අඩු කර නැවත ලිස් කරන්න;

3) පටක සාම්පල නැවුම් නොවේ.නැවුම් පටක සාම්පල භාවිතා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ;

4) දුර්වල ප්‍රාථමික ගුණාත්මකභාවය.ප්‍රාථමිකයේ ගුණාත්මකභාවය සත්‍යාපනය කිරීමට සහ ප්‍රාථමික සැලසුම ප්‍රශස්ත කිරීමට විස්තාරණය සඳහා ප්‍රවේණික DNA භාවිතා කරන්න.

2.විශේෂිත නොවන විස්තාරණය

1) උෂ්ණාධික උෂ්ණත්වය ඉතා අඩු වන අතර චක්‍ර අංකය ඉතා ඉහළ ය.නිර්වින්දන උෂ්ණත්වය වැඩි කිරීම සහ චක්ර සංඛ්යාව අඩු කිරීම;

2) සැකිලි සාන්ද්‍රණය වැඩිය.විස්තාරණය කිරීමෙන් පසු අච්චුව ප්‍රමාණය අඩු කිරීම හෝ අච්චුව 10 වතාවක් තනුක කිරීම;

3) දුර්වල ප්‍රාථමික විශේෂත්වය.ප්‍රයිමර් සැලසුම ප්‍රශස්ත කරන්න.

සටහන්

1.සාම්පල අතර හරස් දූෂණය වළක්වා ගැනීම සඳහා, බහු නියැදි මෙවලම් සකස් කළ යුතු අතර, නැවත නැවත භාවිතා කිරීම අවශ්‍ය නම්, එක් එක් නියැදීමෙන් පසු මෙවලම්වල මතුපිට 2% සෝඩියම් හයිපොක්ලෝරයිට් ද්‍රාවණයකින් හෝ නියුක්ලෙයික් අම්ල ක්ලීනර් සමඟ පිරිසිදු කළ හැකිය.

2.නැවුම් මූසික පටක භාවිතා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලබන අතර, විස්තාරණ ප්රතිඵලවලට බලපෑම් නොකිරීමට නියැදි පරිමාව විශාල නොවිය යුතුය.

3.Lysis Buffer නිතර කැටි කිරීම වැළැක්විය යුතු අතර කෙටි කාලීන බහු භාවිතය සඳහා 2~8℃ දී ගබඩා කළ හැක.අඩු උෂ්ණත්වයක ගබඩා කර ඇත්නම්, වර්ෂාපතනය සිදුවිය හැකි අතර, භාවිතයට පෙර සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හැරිය යුතුය.

4.PCR මිශ්‍රණය නිතර කැටි කිරීම වැළැක්විය යුතු අතර කෙටි කාලීන නැවත නැවත භාවිතය සඳහා 4℃ දී ගබඩා කළ හැක.

5.මෙම නිෂ්පාදනය විද්‍යාත්මක පර්යේෂණාත්මක පර්යේෂණ සඳහා පමණක් වන අතර සායනික රෝග විනිශ්චය හෝ ප්‍රතිකාර සඳහා භාවිතා නොකළ යුතුය.