Bst 2.0 DNA පොලිමරේස් (ග්ලිසරෝල් රහිත)
Bst DNA පොලිමරේස් V2 ව්‍යුත්පන්න වී ඇත්තේ Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I වෙතින් වන අතර එහි 5′→3′ DNA පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම් සහ ශක්තිමත් දාම ප්‍රතිස්ථාපන ක්‍රියාකාරකම් ඇත, නමුත් 5′→3′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් නොමැත.Bst DNA පොලිමරේස් V2 නූල්-විස්ථාපන, සමෝෂ්ණ වර්ධක LAMP (Loop mediated isothermal amplification) සහ වේගවත් අනුපිළිවෙල සඳහා ඉතා සුදුසු වේ.
සංරචක
| සංරචකය | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(Glycerol-free)(8U/μL) | 0.2 මිලි | 1 මිලි | 10 මිලි |
| 10×HC Bst V2 බෆරය | 1.5 මිලි | 2×1.5 මිලි | 3 × 10 මිලි |
| MgSO4(මි.මී. 100) | 1.5 මිලි | 2×1.5 මිලි | 2×10 මිලි |
අයදුම්පත්
1.LAMP සමෝෂ්ණ විස්තාරණය
2.DNA නූල් තනි විස්ථාපන ප්රතික්රියාව
3.High GC ජාන අනුක්‍රමණය
4.නැනෝග්‍රෑම් මට්ටමේ DNA අනුපිළිවෙල.
ගබඩා තත්ත්වය
0°C ට අඩු ප්‍රවාහනය සහ -25°C~-15°C දී ගබඩා කළ යුතුය.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් යනු 65°C උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 30කින් dNTP 25 nmol අම්ල ද්‍රාව්‍ය ද්‍රව්‍යයට ඇතුළත් කරන එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙසයි.
තත්ත්ව පාලනය
1.ප්‍රෝටීන් සංශුද්ධතා තක්සේරුව (SDS-PAGE):Bst DNA පොලිමරේස් V2 හි සංශුද්ධතාවය Coomassie Blue අනාවරණය භාවිතයෙන් SDS-PAGE විශ්ලේෂණය මගින් ≥99% තීරණය වේ.
2.Exonuclease ක්‍රියාකාරකම්:1 μg λ -Hind Ⅲ ජීරණ DNA සමඟ 1 μg λ -Hind Ⅲ ජීරණය DNA සමඟ අවම වශයෙන් 8 U අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 37 ℃ ට පැය 16 ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
3.නිකේස් ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 8 U Bst DNA පොලිමරේස් V2 අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 1 μg pBR322 DNA සමඟ 37°C දී පැය 16ක් සඳහා 37°C හි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස නිශ්චය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
4.RNase ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 8 U Bst DNA පොලිමරේස් V2 අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 1.6 μg MS2 RNA සමඟ 37 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා 37 ° C දී ප්‍රතිඵලයක් ලෙස හඳුනාගත හැකි පරිහානිය සිදු නොවේ.
5.E. coli DNA:E. coli 16S rRNA ලොකස් සඳහා විශේෂිත වූ ප්‍රයිමර් සමඟ TaqMan qPCR භාවිතා කරමින් E. coli ජානමය DNA පැවතීම සඳහා Bst DNA පොලිමරේස් V2 හි 120 U පරීක්ෂා කරනු ලැබේ.E. coli ජානමය DNA දූෂණය ≤1 පිටපතකි.
LAMP ප්රතික්රියාව
| සංරචක | 25μL |
| 10×HC Bst V2 බෆරය | 2.5 μL |
| MgSO4 (මි.මී. 100) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM බැගින්) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 කොළ (25×)a | 1.0 μL |
| ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණයb | 6 μL |
| Bst DNA පොලිමරේස් V2 (ග්ලිසරෝල් රහිත) (8 U/uL) | 1 μL |
| සැකිල්ල | × μL |
| ddH₂O | 25 μL දක්වා |
සටහන්:
1) a.SYTOTM 16 කොළ (25×): පර්යේෂණාත්මක අවශ්‍යතා අනුව, වෙනත් ඩයි වර්ග ආදේශක ලෙස භාවිතා කළ හැක;
2) ආ.ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණය: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB සහ අනෙකුත් වෙළුම් මිශ්‍ර කිරීමෙන් ලබා ගනී.
ප්රතික්රියාව සහ තත්වය
1 × HC Bst V2 බෆරය, ඉන්කියුබේෂන් උෂ්ණත්වය 60°C සහ 65°C අතර වේ.
තාප අක්රිය වීම
80 °C, විනාඩි 20
