උණුසුම් ආරම්භය Bst 2.0 DNA පොලිමරේස් (ග්ලිසරෝල් රහිත)
Bst DNA පොලිමරේස් V2 ව්‍යුත්පන්න වී ඇත්තේ Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I වෙතින් වන අතර එහි 5′→3′ DNA පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම් සහ ශක්තිමත් දාම ප්‍රතිස්ථාපන ක්‍රියාකාරකම් ඇත, නමුත් 5′→3′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් නොමැත.Bst DNA පොලිමරේස් V2 නූල්-විස්ථාපන, සමෝෂ්ණ වර්ධක LAMP (Loop mediated isothermal amplification) සහ වේගවත් අනුපිළිවෙල සඳහා ඉතා සුදුසු වේ.Bst DNA පොලිමරේස් V2 යනු Bst DNA පොලිමරේස් V2 (HC5005A) මත පදනම් වූ උණුසුම්-ආරම්භක අනුවාදයක් වන අතර එය ප්‍රතිවර්ත කළ හැකි වෙනස් කිරීමේ තාක්‍ෂණයෙන් ලබා ගන්නා අතර එමඟින් කාමර උෂ්ණත්වයේ දී DNA පොලිමරේස් ක්රියාකාරිත්වය වළක්වයි, එබැවින් ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය කාමර උෂ්ණත්වයේ දී ක්‍රියාත්මක කර සකස් කළ හැකිය. -විශේෂිත විස්තාරණය සහ ප්‍රතික්‍රියා කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීම, සහ මෙම අනුවාදය lyophilized කළ හැක.මීට අමතරව, එහි ක්රියාකාරිත්වය ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී නිකුත් කරනු ලැබේ, එබැවින් වෙනම සක්රිය කිරීමේ පියවරක් අවශ්ය නොවේ.
සංරචක
| සංරචකය | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA පොලිමරේස් V2 (ග්ලිසරෝල් රහිත)(8U/μL) | 0.2 මිලි | 1 මිලි | 10 මිලි |
| 10×HC Bst V2 බෆරය | 1.5 මිලි | 2×1.5 මිලි | 3 × 10 මිලි |
| MgSO4(මි.මී. 100) | 1.5 මිලි | 2×1.5 මිලි | 2×10 මිලි |
අයදුම්පත්
1.LAMP සමෝෂ්ණ විස්තාරණය
2.DNA නූල් තනි විස්ථාපන ප්රතික්රියාව
3.ඉහළ GC ජාන අනුක්‍රමණය
4.නැනෝග්‍රෑම් මට්ටමේ DNA අනුක්‍රමණය.
ගබඩා තත්ත්වය
0°C ට අඩු ප්‍රවාහනය සහ -25°C~-15°C දී ගබඩා කළ යුතුය.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් යනු 65°C උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 30කින් dNTP 25 nmol අම්ල ද්‍රාව්‍ය ද්‍රව්‍යයට ඇතුළත් කරන එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙසයි.
තත්ත්ව පාලනය
1.ප්‍රෝටීන් සංශුද්ධතා තක්සේරුව (SDS-PAGE):Bst DNA පොලිමරේස් V2 හි සංශුද්ධතාවය Coomassie Blue අනාවරණය භාවිතයෙන් SDS-PAGE විශ්ලේෂණය මගින් ≥99% තීරණය වේ.
2.Endonucleaseක්රියාකාරිත්වය:අවම වශයෙන් 8 U Bst DNA පොලිමරේස් V2 අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 1 μg λDNA සමඟ 37 ℃ ට පැය 16ක් සඳහා ඉන්කියුබේෂන් කිරීම තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
3.Exonuclease ක්‍රියාකාරකම්:1 μg λ -Hind Ⅲ ජීරණ DNA සමඟ 1 μg λ -Hind Ⅲ ජීරණය DNA සමඟ අවම වශයෙන් 8 U අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 37 ℃ ට පැය 16 ක් සඳහා තීරණය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
4.නිකේස් ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 8 U Bst DNA පොලිමරේස් V2 අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 1 μg pBR322 DNA සමඟ 37°C දී පැය 16ක් සඳහා 37°C හි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස නිශ්චය කළ පරිදි හඳුනාගත හැකි පිරිහීමක් සිදු නොවේ.
5.RNase ක්‍රියාකාරකම්:අවම වශයෙන් 8 U Bst DNA පොලිමරේස් V2 අඩංගු 50 μL ප්‍රතික්‍රියාවක් 1.6 μg MS2 RNA සමඟ 37 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා 37 ° C දී ප්‍රතිඵලයක් ලෙස හඳුනාගත හැකි පරිහානිය සිදු නොවේ.
6.E. coliDNA:E. coli 16S rRNA ලොකස් සඳහා විශේෂිත වූ ප්‍රයිමර් සමඟ TaqMan qPCR භාවිතා කරමින් E. coli ජානමය DNA පැවතීම සඳහා Bst DNA පොලිමරේස් V2 හි 120 U පරීක්ෂා කරනු ලැබේ.E. coli ජානමය DNA දූෂණය ≤1 පිටපතකි.
LAMP ප්රතික්රියාව
| සංරචක | 25μL |
| 10×HC Bst V2 බෆරය | 2.5 μL |
| MgSO4 (මි.මී. 100) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM බැගින්) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 කොළ (25×)a | 1.0 μL |
| ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණයb | 6 μL |
| Bst DNA පොලිමරේස් V2 (ග්ලිසරෝල් රහිත) (8 U/uL) | 1 μL |
| සැකිල්ල | × μL |
| ddH₂O | 25 μL දක්වා |
සටහන්:
1) a.SYTOTM 16 කොළ (25×): පර්යේෂණාත්මක අවශ්‍යතා අනුව, වෙනත් ඩයි වර්ග ආදේශක ලෙස භාවිතා කළ හැක;
2) ආ.ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණය: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB සහ අනෙකුත් වෙළුම් මිශ්‍ර කිරීමෙන් ලබා ගනී.
ප්රතික්රියාව සහ තත්වය
1 × HC Bst V2 බෆරය, ඉන්කියුබේෂන් උෂ්ණත්වය 60°C සහ 65°C අතර වේ.
තාප අක්රිය වීම
80°C, විනාඩි 20
