Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG හෝ UDG) යනු 25 kDa අණුක බරක් සහිත E.coli හි ප්‍රතිසංයෝජන ක්ලෝනයකි.එය uracil අඩංගු තනි නූල් සහ ද්විත්ව නූල් DNA වලින් නිදහස් uracil මුදා හැරීම උත්ප්‍රේරණය කරයි, සහ RNA වලට එරෙහිව අක්‍රිය වන අතර PCR වර්ධක නිෂ්පාදන අපවිත්‍ර වීම වැළැක්වීමට භාවිතා කළ හැක.ක්‍රියාකාරීත්වයේ මූලධර්මය පදනම් වී ඇත්තේ PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ දී dTTP වෙනුවට dUTP ආදේශ කර dU භෂ්ම අඩංගු PCR වර්ධක නිෂ්පාදනයක් සෑදෙන්නේ නම්, එන්සයිමයට U භෂ්මවල ග්ලයිකෝසයිඩ් බන්ධනය තනි කෙඳි සහ ද්විත්ව නූල් ලෙස තෝරා බේරා බිඳ දැමිය හැකිය. DNA සහ PCR විස්තාරණ නිෂ්පාදනය පිරිහීමට ලක් කරයි.
නිර්දේශිත යෙදුම
දූෂණය වැළැක්වීමේ විස්තාරණය
ගබඩා තත්ත්වය
දිගු කාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා -20 ° C, භාවිතයට පෙර හොඳින් මිශ්ර කළ යුතුය, නිතර නිතර කැටි කිරීම වළක්වා ගන්න.
ගබඩා බෆරය
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, ස්ථායීකාරක, 50% Glycerol.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
37°C දී පැය 1ක් තුළ dU භෂ්ම අඩංගු තනි කෙඳි සහිත DNA 1µg විනාශ කිරීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ඒකක 1කි.
තත්ත්ව පාලනය
1.SDS-PAGE විද්යුත් විච්ඡේදක සංශුද්ධතාවය 98% ට වැඩි
2.විස්තාරණ සංවේදීතාව, කණ්ඩායමට කණ්ඩායමට පාලනය, ස්ථාවරත්වය
3.UNG 1U විනාඩි 2ක් 50℃ ට ප්‍රතිකාර කළ පසු, පිටපත් 103 ට අඩු U අඩංගු අච්චුව සම්පූර්ණයෙන්ම හායනය කළ යුතු අතර වර්ධක නිෂ්පාදනයක් නිපදවිය නොහැක.
4.බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නොමැත
උපදෙස්
| සංරචක | පරිමාව (μL) | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 10 × PCR බෆරය (dNTP නොමිලේ, Mg²+නිදහස්) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP වෙනුවට) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 මි.මී |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 යූ |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණයඒ | 2 | 1× |
| සැකිල්ල | - | 1μg/ප්‍රතික්‍රියාව |
| ddH₂O | 50 දක්වා | - |
සටහන: a: qPCR/qRT-PCR සඳහා භාවිතා කරන්නේ නම්, ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණය ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියට එක් කළ යුතුය.සාමාන්යයෙන්, 0.2 μM හි අවසාන ප්රාථමික සාන්ද්රණය හොඳ ප්රතිඵල ලබා දිය හැක;ප්‍රතික්‍රියා කාර්ය සාධනය දුර්වල වූ විට, ප්රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1 μM පරාසයකින් සකස් කළ හැක.සාමාන්යයෙන්, පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය 0.1-0.3 μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත වේ.ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රෝබ් වල හොඳම සංයෝජනය සොයා ගැනීමට සාන්ද්‍රණ අනුක්‍රමය අත්හදා බැලීම් සිදු කළ හැක.
සටහන්
1.PCR වර්ධක ප්‍රතික්‍රියාවට පෙර ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියෙන් දූෂිත dUTP වර්ධක නිෂ්පාදන ඉවත් කිරීමට UNG එන්සයිම භාවිතා කළ හැක, ඉන්පසු නිෂ්පාදන දූෂණය වීම හේතුවෙන් ව්‍යාජ ධනාත්මක ප්රතිඵල වළක්වා ගැනීමට.
2.ප්‍රති-දූෂණය PCR ප්‍රතික්‍රියාවේදී UNG එන්සයිම භාවිතා කිරීම සඳහා ප්‍රශස්ත උෂ්ණත්වය සාමාන්යයෙන් මිනිත්තු 2ක් සඳහා 50℃ වේ;අක්‍රිය තත්ත්වය විනාඩි 5ක් සඳහා 95℃ වේ.
3.නිතර කැටිකිරීමෙන් වළකින්න, විශාල උෂ්ණත්ව උච්චාවචනයන්ට නිරාවරණය නොකරන්න.
4.වර්ධනය කළ යුතු විවිධ ජානවලට dUTP හි විවිධ උපයෝගිතා කාර්යක්ෂමතාව සහ UNG එන්සයිම සඳහා සංවේදීතාව ඇත, එබැවින්, UNG පද්ධතියේ භාවිතය හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව අඩුවීමට හේතු වේ නම්, ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය සකස් කර ප්‍රශස්ත කළ යුතුය, ඔබට තාක්ෂණික සහාය අවශ්‍ය නම්, කරුණාකර සම්බන්ධ වන්න. අපේ සමාගම.
