Robustart Taq DNA පොලිමරේස්
Robustart Taq DNA පොලිමරේස් යනු උණුසුම් ආරම්භක DNA පොලිමරේස් ය.මෙම නිෂ්පාදනයට PCR පද්ධති සැකසීමේ සහ විස්තාරණය කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී ප්‍රයිමර්වල නිශ්චිත නොවන ඇනීල් කිරීම හෝ ප්රාථමික එකතු කිරීම නිසා ඇති වන විශේෂිත නොවන ප්‍රතික්‍රියාව වඩා හොඳින් වළක්වා ගත හැකිය.එබැවින්, එය විශිෂ්ට නිශ්චිතතාවයක් ඇති අතර අඩු සාන්ද්‍රණ සැකිලි විස්තාරණය කිරීම සඳහා වඩාත් ඵලදායී වන අතර එය බහුකාර්ය PCR විස්තාරණ ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා සුදුසු වේ.එපමණක් නොව, මෙම නිෂ්පාදනයට ඉතා හොඳ අදාළත්වයක් ඇති අතර, විවිධ වර්ගයේ PCR ප්රතික්රියාවලදී ස්ථාවර විස්තාරණ ප්රතිඵල ලබා ගත හැක.
සංරචක
1.5 U/μL Robustart Taq DNA පොලිමරේස්
2.10 × PCR බෆරය II (Mg²+ නොමිලේ) (විකල්ප)
3.25 mM MgCl2(විකල්ප)
* 10 × PCR බෆරය II (Mg²+ නොමිලේ) dNTP සහ Mg²+ අඩංගු නොවේ, කරුණාකර dNTPs සහ MgCl එක් කරන්න2ප්රතික්රියා පද්ධතිය සකස් කරන විට.
නිර්දේශිත යෙදුම්
1.වේගවත් විස්තාරණය.
2.බහු විස්තාරණය.
3.රුධිරය, ස්පුබ් සහ අනෙකුත් සාම්පල සෘජු විස්තාරණය කිරීම.
4.ශ්වසන රෝග හඳුනා ගැනීම.
ගබඩා තත්ත්වය
දිගු කාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා -20 ° C, භාවිතයට පෙර හොඳින් මිශ්ර කළ යුතුය, නිතර නිතර කැටි කිරීම වළක්වා ගන්න.
*ශීතකරණයෙන් පසු වර්ෂාපතනයක් සිදුවුවහොත් එය සාමාන්‍ය වේ;මිශ්ර කර භාවිතා කිරීමට පෙර කාමර උෂ්ණත්වයට සමතුලිත කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් සක්‍රීය ඒකකයක් (U) යනු සක්‍රීය සැමන් ශුක්‍රාණු DNA සැකිල්ල/ප්‍රාථමිකය ලෙස භාවිතා කරමින් විනාඩි 30ක් සඳහා 74°C දී අම්ල-ද්‍රාව්‍ය නොවන ද්‍රව්‍ය තුළට deoxyribonucleotide 10 nmol ඇතුළත් කරන එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.
තත්ත්ව පාලනය
1.SDS-PAGE විද්යුත් විච්ඡේදක සංශුද්ධතාවය 98% ට වඩා වැඩිය.
2.විස්තාරණ සංවේදීතාව, කණ්ඩායමට කණ්ඩායමට පාලනය, ස්ථාවරත්වය.
3.බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නැත, බාහිර එන්ඩොනියුක්ලීස් හෝ එක්සෝනියුක්ලීස් දූෂණය නොමැත
උපදෙස්
ප්රතික්රියා සැකසුම
| සංරචක | පරිමාව (μL) | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 10 × PCR බෆරය II (Mg²+ නොමිලේ)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM එක් dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 මි.මී |
| Robustart Taq DNA පොලිමරේස් (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 යූ |
| 25 × ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණයබී | 2 | 1× |
| සැකිල්ල | - | 1 μg/ප්‍රතික්‍රියාව |
| ddH2O | 50 දක්වා | - |
සටහන්:
1) a.බෆරයේ dNTP සහ Mg²+ අඩංගු නොවේ, කරුණාකර dNTPs සහ MgCl එක් කරන්න2ප්රතික්රියා පද්ධතිය සකස් කරන විට.
2) ආ.qPCR/qRT-PCR සඳහා භාවිතා කරන්නේ නම්, ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණ ප්රතික්රියා පද්ධතියට එකතු කළ යුතුය.සාමාන්යයෙන්, 0.2 μM හි අවසාන ප්රාථමික සාන්ද්රණය හොඳ ප්රතිඵල ලබා දෙනු ඇත;ප්රතික්රියා කාර්ය සාධනය දුර්වල නම්, ප්රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1 μM පරාසයකින් සකස් කළ හැක.පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය සාමාන්යයෙන් 0.1-0.3 μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත වේ.ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රෝබ් වල හොඳම සංයෝජනය සොයා ගැනීමට සාන්ද්‍රණ අනුක්‍රමය අත්හදා බැලීම් සිදු කළ හැක.
තාප පාපැදි ප්රොටෝකෝලය
| නිතිපතා PCRක්රියාවලිය | |||
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් |
| පූර්ව නිරෝධනය | 95℃ | විනාඩි 1-5 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 10-20 | 40-50 |
| Annealing / Extension | 56-64℃ | තත්පර 20-60 | |
| වේගවත් PCRක්රියාවලිය | |||
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් |
| පූර්ව නිරෝධනය | 95℃ | තත්පර 30 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | තත්පර 1-5 | 40-45 |
| Annealing / Extension | 56-64℃ | තත්පර 5-20 | |
සටහන්
1.වේගවත් DNA පොලිමරේස් වල විස්තාරණ අනුපාතය 1 kb/10 s ට වඩා අඩු නොවිය යුතුය.විවිධ PCR උපකරණවල උෂ්ණත්වය ඉහළ යාම සහ වැටීමේ අනුපාතය, උෂ්ණත්ව පාලන මාදිලිය සහ තාප සන්නායක කාර්යක්ෂමතාව බොහෝ සෙයින් වෙනස් වේ, එබැවින් නිශ්චිත වේගවත් PCR උපකරණය සඳහා ප්‍රශස්ත ප්රතික්රියා තත්ත්වයන් ප්‍රශස්ත කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.
2.පද්ධතිය ඉහළ නිශ්චිතතාවක් සහ සංවේදීතාවයක් සමඟින් බෙහෙවින් අනුවර්තනය වේ.
3.අධි සංවේදී PCR හඳුනාගැනීමේ ප්‍රතික්‍රියාකාරක ලෙස භාවිතා කිරීමට සුදුසු වන අතර, බහුවිධ PCR වර්ධක ප්රතික්රියා වලදී භාවිතා කළ හැක.
4.5′→3′ පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම්, 5′→3′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම්;3′→5′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් නැත;සෝදුපත් කියවීමේ කාර්යයක් නොමැත.
5.PCR සහ RT-PCR ගුණාත්මක හා ප්‍රමාණාත්මක පරීක්ෂණ සඳහා සුදුසු වේ.
6.PCR නිෂ්පාදනයේ 3′ අන්තය A වන අතර එය T දෛශිකයකට කෙලින්ම ක්ලෝන කළ හැක.
7.තුන්-පියවර ක්‍රමය අඩු ඇනීලිං උෂ්ණත්වයක් සහිත ප්‍රයිමර් සඳහා හෝ 200 bp ට වඩා දිගු කොටස් විස්තාරණය කිරීම සඳහා නිර්දේශ කෙරේ.
