DNA නිස්සාරණ මිනි කට්ටලය
මෙම කට්ටලය ප්‍රශස්ත බෆර පද්ධතියක් සහ සිලිකා ජෙල් තීරු පිරිපහදු කිරීමේ තාක්ෂණය භාවිතා කරයි, එමඟින් TAE හෝ TBE ඇගරෝස් ජෙල් වල විවිධ සාන්ද්‍රණයෙන් 70 bp - 20 kb DNA කොටස් නැවත ලබා ගත හැකිය.DNA adsorption column විශේෂයෙන් අධික ලුණු තත්ත්වය යටතේ DNA අවශෝෂණය කළ හැක.මීට අමතරව, කට්ටලයට PCR නිෂ්පාදන, එන්සයිම ප්රතික්රියා පද්ධති හෝ වෙනත් ක්‍රම මගින් ලබා ගන්නා අමු DNA නිෂ්පාදන වලින් DNA කොටස් සෘජුවම පිරිසිදු කළ හැකි අතර ප්‍රෝටීන, අනෙකුත් කාබනික සංයෝග, අකාබනික ලුණු අයන සහ oligonucleotide ප්‍රයිමර් වැනි අපද්‍රව්‍ය ඉවත් කළ හැකිය.මිනිත්තු 10-15 ක් ඇතුළත පිරිසිදු කිරීම සම්පූර්ණ කළ හැකි බව සහතික කළ හැකිය.පිරිසිදු කරන ලද DNA බන්ධනය, පරිවර්තනය, එන්සයිම ජීර්ණය, in vitro පිටපත් කිරීම, PCR, අනුක්‍රමණය, ක්ෂුද්‍ර එන්නත් කිරීම යනාදිය සඳහා කෙලින්ම භාවිතා කළ හැකිය.
ගබඩා කොන්දේසි
-15 ~ -25℃ ගබඩා කර කාමර උෂ්ණත්වයේ ප්රවාහනය කරන්න.
සංරචක
| සංරචක | (රුපියල් 100) |
| බෆර් GDP | 80 මිලි |
| බෆර් GW | 2 × 20 මිලි |
| එලියුෂන් බෆරය | 20 මිලි |
| FastPure DNA කුඩා තීරු-G | 100 |
බෆර් GDP:DNA බන්ධන බෆරය.
බෆර් GW:සේදුම් බෆරය;භාවිතයට පෙර බෝතලයේ දක්වා ඇති පරිමාව අනුව නිරපේක්ෂ එතනෝල් එකතු කරන්න.
ඉවත් කිරීමේ බෆරය:ඉවත් කිරීම.
FastPure DNA කුඩා තීරු-G:DNA අවශෝෂණ තීරු.
එකතු කිරීමේ නල 2 ml:පෙරීම සඳහා එකතු කිරීමේ නල.
සකස් කළ ද්රව්ය
1.5 ml විෂබීජහරණය කළ නල, නිරපේක්ෂ එතනෝල් සහ අයිසොප්‍රොපැනෝල් (ඩීඑන්ඒ ඛණ්ඩනය ≤100 bp විට, පරිමාව 1 ක් එක් කරන්න
isopropanol 1 වෙළුම් ජෙල්), ජල ස්නානය.
අත්හදා බැලීමේ ක්රියාවලිය
භාවිතයට පෙර ටැගයේ දක්වා ඇති පරිදි Buffer GW තනුක කිරීමට එතනෝල් 80 ml එකතු කරන්න, කාමර උෂ්ණත්වයේ ගබඩා කරන්න.
යාන්ත්රණය
1. PCR ප්රතික්රියා විසඳුම
ජෙල් නිස්සාරණ ක්‍රමය: සමාන පරිමාවක් එක් කරන්න බෆර් GDP PCR ප්රතික්රියා විසඳුම් ප්රතිසාධන ක්‍රමය:පරිමාව බෆරය මෙන් 5 ගුණයක් එකතු කරන්න
2. GDP ජෙල් පරිමාව ගණනය කරන්න (100 μl 100 mg ට සමාන වේ)
ජෙල් විසුරුවා හරින්න
3. 50 ~ 55 ට පෙර රත් කරන්න℃
4. බයින්ඩ් වොෂ්
බෆර් GDP 300 μL එකතු කරන්න*
Buffer GW 700 μL එකතු කරන්න
Buffer GW 700 μL එකතු කරන්න
5. Elute
Elution Buffer හෝ deionized ජලය 20 - 30μL එකතු කරන්න
සටහන්* මෙම පියවරෙන් තොරව PCR ප්රතික්රියා තරල ප්රතිසාධනය
ජෙල් නිස්සාරණය කිරීමේ වැඩසටහන
1. ඩීඑන්ඒ කොටස් ඛණ්ඩනය කිරීම සඳහා DNA ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරේසිස් කිරීමෙන් පසුව, පාරජම්බුල කිරණ යටතේ ඇගරෝස් ජෙල් වලින් DNA කැබැල්ලේ තනි තීරුව ඉවත් කරන්න.ජෙල්වල පෙනෙන තෙතමනය අවශෝෂණය කර ගැනීම සඳහා අවශෝෂක කඩදාසි භාවිතා කිරීම සහ ඔබට හැකිතාක් අමතර ඇගරෝස් ඉවත් කිරීමෙන් ජෙල් පෙත්තේ ප්‍රමාණය අවම කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.එහි පරිමාව ගණනය කිරීම සඳහා ජෙල් පෙත්ත (ක්ෂුද්‍ර කේන්ද්‍රපසාරී නලයක් නොමැතිව) කිරා මැන බලන්න: 100 mg ජෙල්සයිස් පරිමාව ආසන්න වශයෙන් 100 μL වේ, ඝනත්වය 1g/ml ලෙස උපකල්පනය කරයි.
2. සමාන වෙළුම් බෆර් GDP එකතු කරන්න, 50~55℃ මිනිත්තු 7-10 සඳහා පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කරන්න (ජෙල් ප්‍රමාණයට අනුව, ජෙල් සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හරින තෙක් ඉන්කියුබේෂන් කාලය සකස් කරන්න).ඉන්කියුබේෂන් අතරතුර 2 වතාවක් නළය පෙරළන්න.
Δ බෆර් GDP වෙළුම් 1-3 ක් එකතු කිරීම DNA ප්රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාවයට බලපාන්නේ නැත.ප්රතිසාධනය කළ යුතු DNA කොටස <100 bp නම්, Buffer GDP වෙළුම් 3ක් එකතු කළ යුතුය;ජෙල් පෙත්ත සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හරින විට, අයිසොප්‍රොපැනෝල් වෙළුම් 1 ක් එකතු කර හොඳින් මිශ්ර කරන්න, ඉන්පසු ඊළඟ පියවරට යන්න.
3. නියැදිය නලයේ පතුලට ගෙන ඒම සඳහා කෙටියෙන් කේන්ද්රාපසාරී, FastPure DNA Mini Columns-G එකතු කිරීමේ නල මිලි ලීටර් 2 තුළට ඇතුළු කරන්න, ද්‍රාවණය උපරිම වශයෙන් 700 μL වරක් ප්‍රවේශමෙන් මාරු කරන්න.
පෙරීමේ තීරු වෙත කාලය, තත්පර 30-60 සඳහා 12,000 rpm (13,800 X g) හි කේන්ද්රාපසාරී.
4. පෙරහන ඉවතලන්න සහ තීරුව වෙත බෆර GDP 300 μL එකතු කරන්න, කාමර උෂ්ණත්වයේ දී විනාඩි 1 ක් පුර්වාංග කරන්න, තත්පර 30-60 සඳහා 12,000 rpm (13,800 X g) දී කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.
5. ෆිල්ටරේට් ඉවතලන්න සහ බෆර් GW 700 μL (නිරපේක්ෂ එතනෝල් කල්තියා එකතු කර ඇත්දැයි පරීක්ෂා කරන්න!) තීරුව වෙත එක් කරන්න, තත්පර 30-60 සඳහා 12,000 rpm (13,800 X g) දී කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.
Δ කරුණාකර adsorption තීරු බිත්තිය වටා Buffer GW එකතු කරන්න, නැතහොත් Buffer GW පසුපස කවරය එකතු කර 2 - 3 වතාවක් උඩු යටිකුරු කර නල බිත්තියට ඇලවූ ලුණු සම්පූර්ණයෙන්ම සේදීමට උදව් කරන්න.
6. පියවර 5 නැවත කරන්න.
Δ බෆර් ජීඩබ්ලිව් සමඟ දෙවරක් සේදීමෙන් ලුණු සම්පූර්ණයෙන්ම ඉවත් කර ඇති බව සහතික කළ හැකි අතර පසුකාලීන අත්හදා බැලීම්වල බලපෑම ඉවත් කළ හැකිය.
7. ෆිල්ටේට් ඉවත දමා හිස් තීරුව විනාඩි 2ක් සඳහා 12,000 rpm (13,800 X g) දී කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.
8. පිරිසිදු 1.5 ml ක්ෂුද්‍ර කේන්ද්රාපසාරී නලයකට තීරුව ඇතුල් කරන්න, තීරු පටලයේ මැදට Elution Buffer 20 - 30 μL එකතු කරන්න, මිනිත්තු 2ක් පුර්වාගත කරන්න, ඉන්පසු විනාඩි 1ක් සඳහා 12,000 rpm (13,800 X g) කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.තීරුව ඉවතලන්න, ලබාගත් DNA -20 හි ගබඩා කරන්න.
Δ 8 වන පියවරේ අධි ප්‍රවාහය නැවත elute කිරීමට තීරුව වෙත මාරු කිරීම සහ Elution Buffer එක 55ට පෙර රත් කිරීම (DNA ඛණ්ඩනය >3 kb විට) ප්රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාව වැඩි කිරීමට උපකාරී වේ.
PCR නිෂ්පාදන ප්රතිසාධන වැඩසටහන
මෙම ප්‍රොටෝකෝලය PCR නිෂ්පාදන, එන්සයිම ප්රතික්රියා පද්ධතිය සහ අනෙකුත් DNA බොර නිෂ්පාදන (ජාන DNA ඇතුළුව) වලින් DNA කොටස් පිරිසිදු කිරීමට අදාළ වේ.මෙම විසඳුම මඟින් විවිධ නියුක්ලියෝටයිඩ, ප්‍රයිමර්, ප්‍රයිමර් ඩිමර්, ලවණ අණු, එන්සයිම සහ අනෙකුත් අපද්‍රව්‍ය කාර්යක්ෂමව ඉවත් කළ හැකිය.
1. කෙටියෙන් කේන්ද්රාපසාරී PCR නිෂ්පාදන, එන්සයිම ප්රතික්රියා ද්‍රාවණය සහ අනෙකුත් DNA බොර නිෂ්පාදන.ඒවායේ පරිමාව පයිප්පයකින් ඇස්තමේන්තු කර විෂබීජහරණය කළ 1.5 ml හෝ 2 ml නලයකට මාරු කරන්න.පරිමාව 100 μL දක්වා වන තෙක් ddH2O එකතු කරන්න;ඉහළ සාන්ද්‍රණයක් සහිත ප්‍රවේණික DNA සඳහා ddH2O සමඟ 300 μL තනුක කිරීම ප්රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීමට උපකාරී වේ.
2. බෆර් GDP වෙළුම් 5 ක් එකතු කරන්න, පෙරළීම හෝ සුළි කිරීම මගින් තරයේ මිශ්ර කරන්න.උනන්දුව ඇති DNA කොටස >100 bp නම්, එතනෝල් අමතර වෙළුම් 1.5ක් (සාම්පල + Buffer GDP) එකතු කළ යුතුය.
3. නැවත එකතු කිරීමේ නලයට තීරුව ඇතුල් කරන්න, මිශ්‍රණය තීරුවට මාරු කරන්න, තත්පර 30 - 60 සඳහා 12,000 rpm (13,800 × g) දී කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.මිශ්ර ද්‍රාවණයේ පරිමාව >700 µL නම්, අවශෝෂණ තීරුව නැවත එකතු කිරීමේ නළයට දමා, ඉතිරි ද්‍රාවණය අවශෝෂණ තීරුවට මාරු කර, තත්පර 30 - 60 සඳහා 12,000 rpm (13,800 × g) දී කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.
4. ඊළඟ කාර්ය සාධනය 08- 1/ජෙල් නිස්සාරණය කිරීමේ වැඩසටහනේ 5 - 8 පියවර වෙත යොමු වේ.
අයදුම්පත්
TAE හෝ TBE ඇගරෝස් ජෙල් වල විවිධ සාන්ද්‍රණයන්;PCR නිෂ්පාදන, එන්සයිම ප්රතික්රියා පද්ධති හෝ විවිධ ක්‍රම මගින් ලබාගත් අනෙකුත් අමු DNA නිෂ්පාදන.ප්රතිසාධන කොටස් පරාසයක පවතී70 bp -20 kb.
සටහන්
පර්යේෂණ භාවිතය සඳහා පමණි.රෝග විනිශ්චය ක්‍රියා පටිපාටිවල භාවිතය සඳහා නොවේ.
1. භාවිතයට පෙර ටැගයේ දක්වා ඇති පරිදි Buffer GW තනුක කිරීමට එතනෝල් 80 ml එකතු කරන්න, කාමර උෂ්ණත්වයේ ගබඩා කරන්න.
2. බෆර් GDP අඩු උෂ්ණත්ව ගබඩා කිරීමේදී අවක්ෂේප කිරීමට පහසු නම්, එය භාවිතයට පෙර යම් කාලයක් කාමර උෂ්ණත්වයේ තැබිය හැක.අවශ්‍ය නම්, වර්ෂාපතනය සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හරින තෙක් එය 37℃ ජල ස්නානයක පෙර රත් කළ හැකි අතර පසුව එය මිශ්ර කිරීමෙන් පසු භාවිතා කළ හැකිය.
3. ජල ස්නානයක උෂ්ණත්වය 50 ~55℃ දක්වා කල්තියා සකසන්න.
4. 08-1/ජෙල් නිස්සාරණය කිරීමේ වැඩසටහනේ පියවර 1 හි, ජෙල් පෙත්තේ ප්‍රමාණය අවම කිරීම මගින් දියවන කාලය සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කරන අතර ප්රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාව වැඩි කරයි (ඉහළ උෂ්ණත්වයකදී අඛණ්ඩව නිරාවරණය වන විට රේඛීය DNA පහසුවෙන් ජල විච්ඡේදනය වේ).පාරජම්බුල කිරණ DNA වලට හානි කළ හැකි බැවින් දීර්ඝ කාලයක් තිස්සේ DNA ජෙල් UV වලට නිරාවරණය නොකරන්න.
5. ජෙල් 08- 1/ජෙල් නිස්සාරණ වැඩසටහනේ පියවර 2 සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හරින්න, එසේ නොමැතිනම් DNA ප්රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාවයට බරපතල ලෙස බලපානු ඇත.
6. DNA ඉවත් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීමට උපකාරී වන Elution Buffer හෝ ddH2O 55℃ දක්වා පෙර රත් කරන්න.2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 - 8.5 ප්‍රමාණයේ DNA ගබඩා කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.
