DNase I (Rnase නොමිලේ)(5u/ul)
බළලා අංකය: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) යනු තනි හෝ ද්විත්ව නූල් සහිත DNA ජීර්ණය කළ හැකි endodeoxyribonuclease වේ.එය 5'-පර්යන්තයේ පොස්පේට් කාණ්ඩ සහ 3'-පර්යන්තයේ හයිඩ්‍රොක්සයිල් සමඟ මොනොඩොක්සිනියුක්ලියෝටයිඩ හෝ තනි හෝ ද්විත්ව නූල් ඔලිගොඩොක්සයිනියුක්ලියෝටයිඩ නිපදවීමට ෆොස්ෆොඩයිස්ටර් බන්ධන හඳුනාගෙන කැඩී යයි.DNase I හි ක්රියාකාරිත්වය Ca මත රඳා පවතී2+සහ Mn වැනි ද්විසංයුජ ලෝහ අයන මගින් සක්රිය කළ හැක2+සහ Zn2+.5 mM Ca2+ජල විච්ඡේදකයෙන් එන්සයිම ආරක්ෂා කරයි.Mg ඉදිරියේ2+, එන්සයිමයට DNA වල ඕනෑම තන්තුවක ඕනෑම ස්ථානයක් අහඹු ලෙස හඳුනා ගැනීමට සහ වෙන් කිරීමට හැකිය.එම්2+, DNA ද්විත්ව කෙඳි එකවරම හඳුනාගෙන එම ස්ථානයේම පාහේ බෙදීමෙන් පැතලි කෙළවර DNA කොටස් හෝ ඇලෙන සුළු අන්ත DNA කොටස් 1-2ක් නෙරා ඇති නියුක්ලියෝටයිඩ සමඟ සෑදිය හැක.
සංරචක
| නම | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-නිදහස් | 20μL | 200μL | මිලි ලීටර් 1 | 10 මිලි |
| 10×DNase I බෆරය | මිලි ලීටර් 1 | මිලි ලීටර් 1 | 5 × 1mL | 5 × 10 මිලි |
ගබඩා කොන්දේසි
ගබඩා කිරීම සඳහා -25℃~-15℃;අයිස් පැකට් යටතේ ප්රවාහනය.
උපදෙස්
1. පහත ලැයිස්තුගත කර ඇති අනුපාතයට අනුව RNase-නිදහස් නලයේ ප්‍රතික්‍රියා විසඳුම සකස් කරන්න:
| සංරචකය | පරිමාව |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I බෆරය | 1μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | 1 U µg RNA① |
| ddH2O | 10μL දක්වා |
සටහන: ①RNA ප්‍රමාණය මත පදනම්ව එකතු කළ යුතු DNase I පරිමාව ගණනය කරන්න.
2. විනාඩි 15 ක් සඳහා 37 ℃;
3. ප්‍රතික්‍රියාව නැවැත්වීමට 2.5mM~5mM හි අවසාන සාන්ද්‍රණයට 0.5M EDTA එකතු කරන්න, සහ ප්‍රතික්‍රියාව නැවැත්වීමට විනාඩි 10ක් 65℃ රත් කරන්න.ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම වැනි ඊළඟ ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා නියැදිය සෘජුවම භාවිත කළ හැකඅත්හදා බැලීම.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් pBR322 1µg සම්පූර්ණයෙන්ම හායනය කරන එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.37℃ දී විනාඩි 10 කින් DNA.
තත්ත්ව පාලනය
RNase:5U DNase I 1.6µg MS2 RNA සමඟ 37℃ පැය 4ක් සඳහා කිසිදු පිරිහීමක් සිදු නොවේ.agrose gel electrophoresis මගින් තීරණය කරනු ලැබේ.
සටහන්
1. කරුණාකර ඔබ විසින්ම 0.5MEDTA සූදානම් කරන්න.
2. RNA µgකට 1U DNase I භාවිතා කරන්න.කෙසේ වෙතත්, RNA 1µg ට වඩා අඩු නම්, කරුණාකර 1U DNase I භාවිතා කරන්න.
3. කරුණාකර මෙහෙයුම අතරතුර එන්සයිමය අයිස් මත තබන්න.
