BspQI
BspQI නිශ්චිත අඩවි හඳුනා ගත හැකි සහ යටතේ නිපදවන E. coli හි නැවත සංයෝජන කළ හැක
BspQI, IIs restriction endonuclease restriction endonuclease, Bacillus sphaericus වෙතින් ක්ලෝන කරන ලද සහ වෙනස් කරන ලද BspQI ජානය රැගෙන යන ප්‍රතිසංයෝජක E. coli වික්‍රියාවකින් ව්‍යුත්පන්න වේ.එයට නිශ්චිත අඩවි හඳුනාගත හැකි අතර, හඳුනාගැනීමේ අනුපිළිවෙල සහ බෙදීම් අඩවි පහත පරිදි වේ:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
නිෂ්පාදන විශේෂාංග
1. ඉහළ ක්රියාකාරිත්වය, වේගවත් ජීර්ණය;
2. අඩු තරු ක්රියාකාරිත්වය, "scalpel" වැනි නිවැරදි කැපීම සහතික කිරීම;
3. BSA නොමැතිව සහ සත්ව සම්භවය නොමිලේ;
මෙතිලේෂන් සංවේදීතාව
Dමම මෙතිල්කරණය:සංවේදී නොවේ;
Dසෙ.මී. මෙතිල්කරණය:සංවේදී නොවේ;
CpG මෙතිල්කරණය:සංවේදී නොවේ;
ගබඩා කොන්දේසි
නිෂ්පාදිතය ≤ 0℃ නැව්ගත කළ යුතුය;-25~- 15℃ තත්ත්‍වයේ ගබඩා කරන්න.
ගබඩා බෆරය
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X- 100 සහ 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
එක් ඒකකයක් යනු 50 µL සම්පූර්ණ ප්රතික්රියා පරිමාවකදී 50°C දී පැය 1ක් තුළ අභ්‍යන්තර පාලන DNA 1µg දිරවීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.
තත්ත්ව පාලනය
ප්‍රෝටීන් සංශුද්ධතා තක්සේරුව (SDS-PAGE):BspQI හි සංශුද්ධතාවය ≥95% SDS-PAGE විශ්ලේෂණය මගින් තීරණය කරන ලදී.
RNase:10U BspQI 1.6μg MS2 RNA සමඟ 50℃ පැය 4ක් සඳහා agarose gel electrophoresis මගින් තීරණය කරන පරිදි කිසිදු පිරිහීමක් නොලැබේ.
විශේෂිත නොවන DNase ක්‍රියාකාරකම්:10U BspQI 1μg λ DNA සමඟ 50℃ පැය 16ක් සඳහා, 50℃ සමඟ සසඳන විට පැය 1ක්, agarose gel electrophoresis මගින් තීරණය කරන පරිදි අතිරික්ත DNA ලබා නොදේ.
බැඳීම සහ නැවත කැපීම:10U BspQI සමඟ 1 μg λDNA දිරවීමෙන් පසුව, DNA කොටස් 16ºC දී T4 DNA ligase සමඟ බන්ධනය කළ හැක.තවද මෙම බන්ධන කොටස් BspQI සමඟ නැවත කපා ගත හැක.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-විශේෂිත TaqMan qPCR හඳුනාගැනීමෙන් පෙන්නුම් කළේ E.coli ජෙනෝම අවශේෂ ≤ 0.1pg/ul බවයි.
ධාරක ප්‍රෝටීන් අපද්‍රව්‍ය:≤ 50 ppm
බැක්ටීරියා එන්ඩොටොක්සින්: LAL-test, Chinese Pharmacopoeia IV 2020 සංස්කරණයට අනුව, ජෙල් සීමාව පරීක්ෂණ ක්‍රමය, සාමාන්‍ය රීතිය (1143).බැක්ටීරියා එන්ඩොටොක්සින් අන්තර්ගතය ≤10 EU/mg විය යුතුය.
ප්රතික්රියා පද්ධතිය සහ කොන්දේසි
| සංරචකය | පරිමාව |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I බෆරය | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL දක්වා |
ප්රතික්රියා කොන්දේසි: 50℃, පැය 1~ 16
තාප අක්රිය කිරීම: විනාඩි 20 ක් සඳහා 80 ° C.
නිර්දේශිත ප්රතික්රියා පද්ධතිය සහ කොන්දේසි සාපේක්ෂව හොඳ එන්සයිම දිරවීමේ බලපෑමක් සැපයිය හැක, එය යොමුව සඳහා පමණි, කරුණාකර විස්තර සඳහා පර්යේෂණාත්මක ප්‍රතිඵල බලන්න.
නිෂ්පාදන යෙදුම
සීමා කිරීම් endonuclease ජීර්ණය, වේගවත් ක්ලෝනකරණය.
සටහන්
1. එන්සයිමයේ පරිමාව ≤ 1/10 ප්රතික්රියා පරිමාව.
2. ග්ලිසරෝල් සාන්ද්‍රණය 5% ට වඩා වැඩි වූ විට තරු ක්‍රියාකාරකම් සිදු විය හැක.
3. උපස්ථරය නිර්දේශිත අනුපාතයට වඩා පහළින් ඇති විට කැඩී යාමේ ක්‍රියාකාරකම් සිදු විය හැක.
