2×PCR ප්‍රධාන මිශ්‍රණය (ඩයි රහිත)
PCR Master Mix යනු Taq DNA පොලිමරේස්, dNTP මිශ්‍රණය MgCl2 සහ ප්‍රශස්ත බෆරය ඇතුළුව භාවිතා කිරීමට සූදානම් වන සාම්ප්‍රදායික PCR පෙර මිශ්‍ර විසඳුමකි.ප්‍රතික්‍රියාව අතරතුර, විස්තාරණය සඳහා ප්‍රාථමිකය සහ අච්චුව පමණක් එකතු කළ හැකි අතර, එය අත්හදා බැලීමේ මෙහෙයුම් පියවර බෙහෙවින් සරල කරයි.මෙම නිෂ්පාදනයේ විශිෂ්ට ස්ථායීකාරක අඩංගු වන අතර 4℃ උෂ්ණත්වයකදී මාස 3ක් ගබඩා කළ හැක.PCR නිෂ්පාදනයට 3′-dA නෙරා ඇති අතර පහසුවෙන් T දෛශිකයට ක්ලෝන කළ හැක.
ගබඩා කොන්දේසි
නිෂ්පාදිතය වසර දෙකක් සඳහා -25℃~ -15℃ ගබඩා කළ යුතුය.
පිරිවිතර
| විශ්වාසවන්තභාවය (එදිරිව Taq) | 1× |
| උණුසුම් ආරම්භය | No |
| උඩින් එල්ලීම | 3′-ඒ |
| පොලිමරේස් | Taq DNA පොලිමරේස් |
| ප්රතික්රියා ආකෘතිය | SuperMix හෝ Master Mix |
| ප්රතික්රියා වේගය | සම්මත |
| නිෂ්පාදන වර්ගය | PCR Master Mix (2×) |
උපදෙස්
1.ප්රතික්රියා පද්ධතිය
| සංරචක | ප්‍රමාණය (μL) |
| DNA සැකිල්ල | සුදුසු |
| ප්‍රාථමික 1 (10 μmol/L) | 2 |
| ප්‍රයිමර් 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR මාස්ටර් මික්ස් | 25 |
| ddH2O | 50 දක්වා |
2.විස්තාරණ ප්රොටෝකෝලය
| චක්‍ර පියවර | උෂ්ණත්වය (°C) | කාලය | සයිකල් |
| පූර්ව නිරෝධනය | 94℃ | විනාඩි 5 | 1 |
| Denaturation | 94℃ | තත්පර 30 | 35 |
| නිර්වින්දනය | 50-60 ℃ | තත්පර 30 | |
| දිගු කිරීම | 72℃ | තත්පර 30-60/kb | |
| අවසාන දිගුව | 72℃ | විනාඩි 10 | 1 |
සටහන්:
1) සැකිලි භාවිතය: 50-200 ng ජානමය DNA;0.1- 10 ng ප්ලාස්මිඩ් DNA.
2) එම්.ජී2+සාන්ද්‍රණය: මෙම නිෂ්පාදනයේ බොහෝ PCR ප්රතික්රියා සඳහා සුදුසු MgCl2 3 mM අඩංගු වේ.
3) Annealing උෂ්ණත්වය: කරුණාකර Primers හි සෛද්ධාන්තික Tm අගය වෙත යොමු වන්න.ප්‍රාථමිකයේ න්‍යායික අගයට වඩා 2-5 ℃ දක්වා අඩුවෙන් නිර්වින්දන උෂ්ණත්වය සැකසිය හැක.
4) දිගු කාලය: අණු හඳුනා ගැනීම සඳහා, තත්පර 30/kb නිර්දේශ කෙරේ.ජාන ක්ලෝනකරණය සඳහා, 60තත්පර/kb නිර්දේශ කෙරේ.
සටහන්
1.ඔබගේ ආරක්ෂාව සහ සෞඛ්‍යය සඳහා, කරුණාකර ක්‍රියා කිරීම සඳහා රසායනාගාර කබා සහ ඉවත දැමිය හැකි අත්වැසුම් පළඳින්න.
2.පර්යේෂණ භාවිතය සඳහා පමණි!
