උෂ්ණත්ව සංවේදී UNG
උෂ්ණත්ව සංවේදී UNG (TS-UNG) යනු E. coli හි ප්‍රතිසංයෝජක ප්‍රකාශනය මගින් ලබා ගත් දෙයකි.එන්සයිමය යුරේසිල් අඩංගු තනි සහ ද්විත්ව නූල් DNA වලින් නිදහස් uracil මුදා හැරීම උත්ප්‍රේරණය කරන අතර RNA වලට එරෙහිව අක්‍රිය වේ.E. coli ජාන සම්භවයක් ඇති සාම්ප්‍රදායික UNG එන්සයිමය හා සසඳන විට, TS-UNG එන්සයිමය අඩු උෂ්ණත්වවලදී (20℃~37℃) ඉහළ ක්‍රියාකාරීත්වයක් ඇති අතර, dUTP අඩංගු විස්තාරණය දිරාපත් වීම වළක්වමින් උෂ්ණත්වයට සංවේදී වන අතර පහසුවෙන් අක්‍රිය (50℃) වේ. සාම්ප්‍රදායික යූඑන්ජී එන්සයිම අක්‍රිය කිරීමෙන් පසු ඉතිරි විය හැකි අවශේෂ ක්‍රියාකාරකම් මගින් කාමර උෂ්ණත්වයේ නිෂ්පාදන.එබැවින්, TS-UNG එන්සයිමය PCR දූෂණය වැළැක්වීමේ ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා පමණක් සුදුසු නොවේ, නමුත් RT-PCR විස්තාරණ වැඩසටහන සමඟ හොඳින් ගැලපෙන අතර RT-PCR දූෂණය වැළැක්වීමේ ප්‍රතික්‍රියාවේදී භාවිතා කළ හැකිය.
නිර්දේශිත යෙදුම
දූෂණය වැළැක්වීමේ විස්තාරණය
ගබඩා තත්ත්වය
දිගු කාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා -20 ° C, භාවිතයට පෙර හොඳින් මිශ්ර කළ යුතුය, නිතර නිතර කැටි කිරීම වළක්වා ගන්න.
ගබඩා බෆරය
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, ස්ථායීකාරක, 50% Glycerol.
ඒකක අර්ථ දැක්වීම
37°C දී පැය 1ක් තුළ dU භෂ්ම අඩංගු තනි කෙඳි සහිත DNA 1µg ක් හායනය කිරීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ක්‍රියාකාරකම් ඒකක 1කි (U).
තත්ත්ව පාලනය
1.SDS-PAGE විද්යුත් විච්ඡේදක සංශුද්ධතාවය 98% ට වැඩි
2.පිරිහීමේ ක්‍රියාකාරකම්, කණ්ඩායමෙන් කණ්ඩායමට පාලනය, ස්ථාවරත්වය
3.බාහිර න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් නැත, බාහිර එන්ඩොනියුක්ලීස් හෝ එක්සෝනියුක්ලීස් දූෂණය නොමැත.
උපදෙස්
| සංරචක | පරිමාව (μL) | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 10 × PCR බෆරය (dNTP නොමිලේ, Mg²+නිදහස්) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP වෙනුවට) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 මි.මී |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 යූ |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ප්‍රයිමර් මිශ්‍රණයඒ | 2 | 1× |
| සැකිල්ල | - | 1μg/ප්‍රතික්‍රියාව |
| ddH₂O | 50 දක්වා | - |
සටහන: a: qPCR/qRT-PCR සඳහා භාවිතා කරන්නේ නම්, ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණය ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියට එක් කළ යුතුය.සාමාන්යයෙන්, 0.2 μM හි අවසාන ප්රාථමික සාන්ද්රණය හොඳ ප්රතිඵල ලබා දිය හැක;ප්‍රතික්‍රියා කාර්ය සාධනය දුර්වල වූ විට, ප්රාථමික සාන්ද්රණය 0.2-1 μM පරාසයකින් සකස් කළ හැක.සාමාන්යයෙන්, පරීක්ෂණ සාන්ද්රණය 0.1-0.3 μM පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත වේ.ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රෝබ් වල හොඳම සංයෝජනය සොයා ගැනීමට සාන්ද්‍රණ අනුක්‍රමය අත්හදා බැලීම් සිදු කළ හැක.
සටහන්
1.TS-UNG එන්සයිමයේ ප්‍රශස්ත ප්‍රතික්‍රියා උෂ්ණත්වය සාපේක්ෂව අඩු වන අතර එය 20℃~37℃ පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක, එන්සයිමයේ මාත්‍රාව සහ ප්‍රතික්‍රියා කාලය 0.1~0.5 U, 5~ පරාසය තුළ ප්‍රශස්ත කළ හැක. විනාඩි 10;සහ ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී එන්සයිම අක්‍රිය කළ හැක.
2.එය දූෂණය වැළැක්වීම සඳහා PCR සහ RT-PCR සඳහා සුදුසු වේ.
3.නිතර කැටිකිරීමෙන් වළකින්න, විශාල උෂ්ණත්ව උච්චාවචනයන්ට නිරාවරණය නොකරන්න.
4.වර්ධනය කළ යුතු විවිධ ජානවලට dUTP හි විවිධ උපයෝගිතා කාර්යක්ෂමතාව සහ UNG එන්සයිම සඳහා සංවේදීතාව ඇත, එබැවින්, UNG පද්ධතියේ භාවිතය හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව අඩුවීමට හේතු වේ නම්, ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය සකස් කර ප්‍රශස්ත කළ යුතුය, ඔබට තාක්ෂණික සහාය අවශ්‍ය නම්, කරුණාකර සම්බන්ධ වන්න. අපේ සමාගම.
