DNase I

DNase I (Deoxyribonuclease I) යනු තනි හෝ ද්විත්ව නූල් සහිත DNA ජීර්ණය කළ හැකි endodeoxyribonuclease වේ.එය 5′-පර්යන්තයේ පොස්පේට් කාණ්ඩ සහ 3′-පර්යන්තයේ හයිඩ්‍රොක්සයිල් සමඟ මොනොඩොක්සිනියුක්ලියෝටයිඩ හෝ තනි හෝ ද්විත්ව නූල් ඔලිගොඩොක්සයිනියුක්ලියෝටයිඩ නිපදවීමට ෆොස්ෆොඩීස්ටර් බන්ධන හඳුනාගෙන වෙන් කරයි.DNase I හි ක්‍රියාකාරිත්වය Ca2+ මත රඳා පවතින අතර Mn2+ සහ Zn2+ වැනි ද්විසංයුජ ලෝහ අයන මගින් සක්‍රිය කළ හැක.5mM Ca2+ එන්සයිම ජල විච්ඡේදකයෙන් ආරක්ෂා කරයි.Mg2+ පවතින විට, එන්සයිමයට DNA වල ඕනෑම තන්තුවක ඇති ඕනෑම ස්ථානයක් අහඹු ලෙස හඳුනාගෙන වෙන් කළ හැක.Mn2+ හමුවේ, DNA වල ද්විත්ව කෙඳි එකවර හඳුනාගෙන එම ස්ථානයේම පාහේ බෙදීමෙන් පැතලි කෙළවර DNA කොටස් හෝ ඇලෙන සුළු අන්ත DNA කොටස් 1-2ක් නෙරා ඇති නියුක්ලියෝටයිඩ සමඟ සෑදිය හැක.

නිෂ්පාදන දේපල

Bovine Pancreas DNase I යීස්ට් ප්‍රකාශන පද්ධතියෙන් ප්‍රකාශ කර පිරිසිදු කර ඇත.

Cවිරුද්ධවාදීන්

ප්රවාහනය සහ ගබඩා කිරීම

1. ගබඩා ස්ථායිතාව: – ගබඩා කිරීම සඳහා 15℃~-25℃;

2.ප්රවාහන ස්ථායීතාව: අයිස් ඇසුරුම් යටතේ ප්රවාහනය;

3. සපයනු ලබන්නේ: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl₂, 50% glycerol, pH 7.6 at 25℃ .

ඒකක අර්ථ දැක්වීම

එක් ඒකකයක් යනු 37°C උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 10කින් pBR322 DNA 1 µg සම්පූර්ණයෙන්ම හායනය කරන එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස අර්ථ දැක්වේ.

තත්ත්ව පාලනය

RNase:5U DNase I 1.6 μg MS2 RNA සමඟ 37 ℃ පැය 4 ක් සඳහා agarose gel electrophoresis විසින් තීරණය කරන පරිදි කිසිදු පිරිහීමක් ලබා නොදේ.

බැක්ටීරියා එන්ඩොටොක්සින්:LAL-test, Chinese Pharmacopoeia IV 2020 සංස්කරණයට අනුව, ජෙල් සීමාව පරීක්ෂණ ක්‍රමය, සාමාන්‍ය රීතිය (1143).බැක්ටීරියා එන්ඩොටොක්සින් අන්තර්ගතය ≤10 EU/mg විය යුතුය.

භාවිතය සඳහා උපදෙස්

1.පහත ලැයිස්තුගත කර ඇති අනුපාතයට අනුව RNase-නිදහස් නලයේ ප්‍රතික්‍රියා විසඳුම සකස් කරන්න:

විනාඩි 15 ක් සඳහා 2.37 ℃;

3.ප්‍රතික්‍රියාව නැවැත්වීමට ටර්මිනේෂන් බෆරය එක් කරන්න, DNase I අක්‍රිය කිරීමට මිනිත්තු 10ක් 65℃ රත් කරන්න. නියැදිය ඊළඟ පිටපත් කිරීමේ අත්හදා බැලීම සඳහා කෙලින්ම භාවිතා කළ හැක.

සටහන්

1.RNA හි μg සඳහා 1U DNase I හෝ 1μg RNA ට අඩු 1U DNase I භාවිතා කරන්න.

2.එන්සයිම අක්‍රිය කිරීමේදී RNA ක්ෂය වීමෙන් ආරක්ෂා කිරීම සඳහා 5 mM අවසාන සාන්ද්‍රණයකට EDTA එකතු කළ යුතුය.