CHO HCP ELISA කට්ටලය
මෙම විශ්ලේෂණයේදී එක්-පියවර ප්‍රතිශක්තිකරණ ELISA ක්‍රමයක් භාවිතා කරයි.CHOK1 HCP අඩංගු සාම්පල HRP-ලේබල් කරන ලද එළු ප්‍රති-CHOK1 ප්රතිදේහ සහ ELISA තහඩුව මත ආලේප කර ඇති ප්‍රති-CHOK1 ප්රතිදේහ සමඟ එකවර ප්‍රතික්‍රියා කරයි, අවසානයේ ඝන-අදියර ප්රතිදේහ-HCP-ලේබල් කරන ලද ප්‍රතිදේහයේ සැන්ඩ්විච් සංකීර්ණයක් සාදයි.ELISA තහඩුව සේදීම මගින් නොබැඳි ප්රතිදේහ-ප්රතිදේහ ඉවත් කළ හැකිය.ප්රමාණවත් ප්රතික්රියාවක් සඳහා TMB උපස්ථරය ළිඳට එකතු වේ.නැවතුම් ද්රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු වර්ණ වර්ධනය නවත්වන අතර, 450/650nm හි ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණයේ OD හෝ අවශෝෂණ අගය මයික්රොප්ලේට් කියවනයකින් කියවනු ලැබේ.OD අගය හෝ අවශෝෂණ අගය විසඳුමේ HCP අන්තර්ගතයට සමානුපාතික වේ.මෙයින්, විසඳුමේ HCP සාන්ද්රණය සම්මත වක්රය අනුව ගණනය කළ හැක.
අයදුම්පත
මෙම කට්ටලය සාම්පලවල CHOK1 ධාරක සෛල ප්‍රෝටීන් අපද්‍රව්‍යවල අන්තර්ගතය ප්‍රමාණාත්මකව හඳුනා ගැනීමට භාවිතා කරයි.
Cවිරුද්ධවාදීන්
| S/N | සංරචකය | සමාධිය | ගබඩා කොන්දේසි |
| 1 | CHOK1 HCP සම්මතය | 0.5mg/mL | ≤-20℃ |
| 2 | විරෝධී CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤-20℃, ආලෝකයෙන් ආරක්ෂා කරන්න |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, ආලෝකයෙන් ආරක්ෂා කරන්න |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | විසඳුම නවත්වන්න | NA | RT |
| 6 | මයික්රොප්ලේට් සීලර් | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | අධි අවශෝෂණ පූර්ව ආලේපන තහඩු | NA | 2-8℃ |
අවශ්ය උපකරණ
| පරිභෝජන භාණ්ඩ / උපකරණ | නිෂ්පාදනය | නාමාවලිය |
| මයික්රොප්ලේට් කියවනය | අණුක උපාංග | Spectra Max M5, M5e, හෝ ඊට සමාන |
| තාපමික්සර් | එපෙන්ඩෝෆ් | Eppendorf/5355, හෝ ඊට සමාන |
| වෝටෙක්ස් මික්සර් | IKA | MS3 ඩිජිටල්, හෝ ඊට සමාන |
ගබඩා කිරීම සහ ස්ථාවරත්වය
1.ප්‍රවාහනය -25~-15°C.
2.ගබඩා කොන්දේසි වගුව 1 හි පෙන්වා ඇත;සංරචක 1-2 ගබඩා කර ඇත ≤-20 ° C, 5-6 ගබඩා කර ඇත RT,3、4,7,8 2-8℃ ගබඩා කර ඇත;වලංගු කාලය මාස 12 කි.
නිෂ්පාදන පරාමිතීන්
1.සංවේදීතාව: 1ng/mL
2.හඳුනාගැනීමේ පරාසය:3-100ng/mL
3.නිරවද්‍යතාවය: අභ්‍යන්තර විශ්ලේෂණය CV≤ 10%, අන්තර්-විශ්ලේෂණ CV≤ 15%
4.HCP ආවරණය:>80%
5.විශේෂත්වය: පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රියාවලියෙන් ස්වාධීනව CHOK1 HCP සමඟ විශේෂයෙන් ප්‍රතික්‍රියා කරන බැවින් මෙම කට්ටලය විශ්වීය වේ.
ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම
1.PBST 0.05%
ddH හි තනුක 20×PBST 0.05% මිලි ලීටර් 15 ක් ගන්න2O, සහ 300 ml දක්වා සාදා ඇත.
2.1.0% BSA
බෝතලයෙන් BSA ග්‍රෑම් 1ක් ගෙන PBST 0.05% මිලිලීටර් 100ක තනුක කර සම්පූර්ණයෙන්ම දියවන තුරු හොඳින් මිශ්‍ර කර 2-8°C උෂ්ණත්වයක ගබඩා කරන්න.සකස් කරන ලද තනුක බෆරය දින 7 ක් සඳහා වලංගු වේ.අවශ්ය පරිදි සකස් කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.
3.හඳුනාගැනීමේ විසඳුම 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP හි 48μL ගෙන 1% BSA හි 11,952μL තනුක කර අවසාන සාන්ද්රණය 2μg/mL හඳුනාගැනීමේ ද්‍රාවණයක් ලබා ගන්න.
4.QC සහ CHOK1 HCP ප්‍රමිති සකස් කිරීම
| නළය නැත. | මුල් | සමාධිය | පරිමාව | 1% BSA | මුළු පරිමාව | අවසාන |
| A | සම්මත | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 කි |
| B | A | 10,000 කි | 50 | 450 | 500 | 1,000 කි |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
වගුව: QC සහ සම්මතයන් සකස් කිරීම
විශ්ලේෂණ ක්රියා පටිපාටිය
1.ඉහත "ප්රතික්රියාකාරක සූදානම" හි දක්වා ඇති පරිදි ප්රතික්රියාකාරක සකස් කරන්න.
2.සෑම ළිඳකටම ප්‍රමිති, සාම්පල සහ QC 50μL (වගුව 3 බලන්න) ගන්න, ඉන්පසු 100μL හඳුනාගැනීමේ ද්රාවණය (2μg/mL) එකතු කරන්න;සීලර් සමඟ තහඩුව ආවරණය කරන්න, සහ ELISA තහඩුව thermomixer මත තබන්න.පැය 2ක් සඳහා 500rpm, 25±3℃ දී ඉන්කියුබේට් කරන්න.
3.සින්ක් තුළ ඇති මයික්රොප්ලේට් පෙරළා දමා ආලේපන ද්රාවණය ඉවතලන්න.ELISA තහඩුව සෝදා ද්රාවණය ඉවත දැමීමට PBST 0.05% බැගින් 300μL බැගින් ළිඳට දමා නැවත සේදීම 3 වරක් කරන්න.පිරිසිදු කඩදාසි තුවායක් මත පිඟාන පෙරළා වියළා ගන්න.
4.සෑම ළිඳකටම 100μL TMB උපස්ථරයක් එක් කරන්න (වගුව 1 බලන්න), ELISA තහඩුව මුද්‍රා කර, 25±3℃ අඳුරේ විනාඩි 15ක් පුර්වාගත කරන්න.
5.එක් එක් ළිඳට නැවතුම් ද්රාවණය 100μL පයිපෙට් කරන්න.
6.මයික්රොප්ලේට් රීඩර් සමඟ 450/650nm තරංග ආයාමයේදී අවශෝෂණය මැනීම.
7.SoftMax හෝ ඊට සමාන මෘදුකාංග මගින් දත්ත විශ්ලේෂණය කරන්න.පරාමිති හතරක ලොජිස්ටික් ප්‍රතිගාමී ආකෘතියක් භාවිතයෙන් සම්මත වක්රය සැලසුම් කරන්න.
සම්මත වක්‍ර උදාහරණය
සටහන: සාම්පලයේ HCP සාන්ද්රණය සම්මත වක්‍රයේ ඉහළ සීමාව ඉක්මවන්නේ නම්, පරීක්ෂා කිරීමට පෙර එය තනුක බෆරය සමඟ නිසි ලෙස තනුක කළ යුතුය.
සටහන්
නැවතුම් ද්රාවණය 2M සල්ෆියුරික් අම්ලය වේ, කරුණාකර ඉසීම වැළැක්වීමට ප්‍රවේශමෙන් හසුරුවන්න!
